[发明专利]使用摇动平台生物反应器的多能干细胞扩增和传代

说明书

本文提供用于包含干细胞和/或分化的细胞的细胞聚集体的扩增和传代的新的方法，并包括在摇动平台生物反应器上的封闭系统的用途。本发明的方法允许具有相关的多能性标记和分化潜能的多能干细胞和/或其后代的封闭系统连续传代扩增。

背景

本公开内容一般涉及使用摇动平台扩增细胞和/或细胞聚集。

对于在多能干细胞建库(如，对于诱导的多能干细胞)、细胞(如，GE的CytivaTM心肌细胞)的商业化生产和临床试验的细胞扩增中的应用，对大规模多能干细胞培养的需要正凸显出来。无饲养层多能干细胞培养的发展使得在烧瓶中、在生物反应器中的微载体(直径150-250微米)或大载体(直径~6 mm)上的大规模细胞扩增成为可能。采用悬浮培养避免了一些挑战，这些挑战在传统微载体上培养多能细胞时发生，包括细胞自载体的低效接种和释放，在收获期间微载体和细胞的物理分离，和可导致细胞的表型改变的细胞-载体团块的形成。通常，灌注被用于生物反应器中的悬浮培养。

然而在灌注/悬浮培养中的一个挑战是如何在生物反应器中保留细胞。现有技术提供一些基本的分离技术 --1) 过滤，2) 重力沉降，和3) 离心分离。过滤方法需要一些装置，以在操作需要的数周内保持滤器避免堵塞。重力沉降的问题是不同细胞的沉降特征各不相同，难以放大到工业系统，且难以保持无菌。类似地，离心分离被常规用于开放的细胞培养，但由于关于无菌的担心，已发现在全封闭系统细胞培养中的应用有限。

在本领域中对在培养细胞(包括多能干细胞和/或分化的人细胞)的过程中减少人干预和交叉污染的技术存在需要。

发明简述

本文描述用于培养细胞，包括多能干细胞和/或分化的人细胞的改进方法。

本文提供用于在封闭系统中扩增细胞聚集体的方法，其包括

在摇动平台上的细胞培养容器；

在容器中的细胞聚集体的自动灌注；和

在灌注期间的细胞聚集体的无膜过滤。

在另一方面，本文提供用于在封闭系统中扩增细胞聚集体的方法，其包括

在摇动平台生物反应器上的细胞培养容器；

在容器中的聚集体形成；

在容器中的细胞聚集体的自动灌注；

在灌注期间的细胞聚集体的无膜过滤；和

在封闭系统中的聚集体收获和传代。

本文还提供一种传代细胞聚集体的方法，其中细胞聚集体的尺寸用与封闭系统中的生物反应器连接的限制器网格减少。

本文还提供使用在此描述的方法，用于扩增细胞聚集体的封闭系统。

附图

当参照附图阅读以下详细的描述时，本发明的这些和其它特征、方面和优点将变得更易理解，其中整个附图中的同样的符号代表同样的部件，其中：

图1显示了大于10次传代的扩增适应。在细胞培养容器(如，Xuri Cellbag生物反应器)中培养之前，在低附着6孔板和烧瓶上，或在摇动条件下在VueLife袋中，将细胞自MatrigelTM至悬浮聚集体进行适应。

图2显示用于多能干细胞培养的示例性系统，即Xuri W25系统的示意图。

图3显示用于控制软件的用户界面的样例图像。所示的样例图像并不意味着代表和/或另外限制在此描述的培养条件。

图4显示Xuri Cellbag生物反应器。