[发明专利]使用摇动平台生物反应器的多能干细胞扩增和传代

权利要求书

1.一种在封闭系统中扩增细胞聚集体的方法，其包括

在摇动平台生物反应器上的细胞培养容器；

在容器中的聚集体形成；

在容器中的细胞聚集体的自动灌注；

在灌注期间的细胞聚集体的无膜过滤，其中，在灌注期间，在不存在滤膜的情况下，细胞聚集体通过细胞聚集体的重力沉降而保留在袋中；和

在封闭系统中的聚集体收获和传代，

其中扩增的细胞聚集体包含多能干细胞或分化的人细胞。

2.权利要求1的方法，其中所述自动灌注在无人干预下，在封闭系统中进行。

3.权利要求1或2的方法，其还包括细胞聚集体或其后代通过进行连续传代的一次或多次另外的扩增。

4.权利要求3的方法，其中细胞聚集体或其后代的一次或多次另外的扩增通过传代到具有膜滤器的第二个容器中进行。

5.权利要求3的方法，其中细胞聚集体的连续传代能够通过在封闭系统中使用限制器网格的无酶传代进行。

6.权利要求5的方法，其中细胞聚集体用具有分开距离20-500微米的刀片的限制器网格分离。

7.权利要求5或6的方法，其中细胞聚集体用具有分开距离100微米的刀片的限制器网格分离。

8.权利要求5的方法，其中细胞聚集体用符合管道系统的限制器网格和用于混合细胞聚集体的装置分离。

9.权利要求5的方法，其中限制器用疏水材料涂布或包含疏水材料。

10.权利要求3的方法，其中细胞聚集体的连续传代能够在酶的存在下，通过在封闭系统容器中分离细胞聚集体来进行。

11.权利要求5或6的方法，其中每个扩增的细胞聚集体的平均直径尺寸不超过800微米。

12.权利要求5或6的方法，其中每个扩增的细胞聚集体的平均直径尺寸不超过500微米。

13.权利要求5或6的方法，其中培养容器的容积是50 mL-100 L。

14.权利要求13的方法，其中培养容器的容积是100 mL-10 L。