[发明专利]多特异性抗体平台和相关方法

说明书

本文公开了新的多特异性抗体平台、多特异性抗体和制备所述抗体的方法。通过增加一条链的正电荷和另一条链的负电荷，修饰包含Fc区的多肽链的CH3结构域。使用所述修饰的链共转染中的异二聚体形成与使用野生型多肽转染相同细胞系时野生型抗体的形成是可比较的。此外，所述修饰提供了所述异二聚体的简单的一步纯化。

优先权要求

本专利申请要求2015年8月26日提交的美国临时申请系列号62/209,978的优先权，且其内容通过提述以其整体并入本文。

序列表

本申请含有序列数据。

发明领域

本发明涉及多特异性抗体平台、多特异性抗体，包括双特异性抗体，和产生它们的方法。

发明背景

抗体是大的糖蛋白，其由B淋巴细胞衍生的浆细胞响应于抗原而分泌。存在五种主要类型的抗体：IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。IgG占人体内血清抗体的约75％，且其是存在于循环中的最常见类型的抗体。在所有五种主要类型的抗体中，基本单元是Y形状的单体，其由两条相同的重链(HC)和两条相同的轻链(LC)组成。每条LC具有一个可变结构域(VL)和一个恒定结构域(CL)。每个HC具有一个可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH)。Y结构中的‘臂’形成抗原结合片段(Fab)。该臂通过柔性铰链区连接至同二聚体Fc片段(可结晶片段)，其形成Y结构的‘底座’。抗体与免疫系统的其它组分通信的能力经由Fc区介导。在哺乳动物细胞系中产生同二聚体Fc区是本领域中已知的。此类同二聚体Fc区可以用于例如将抗体样特性带给融合蛋白。

双特异性抗体(BsAb)是人工蛋白，其由两个不同抗体的片段构成，且因此BsAb结合两种不同类型的抗原。双特异性抗体属于多特异性抗体。多特异性抗体可以是双特异性的、三特异性的，或四特异性的抗体。此类多特异性抗体的Fc片段优选是异二聚体。双特异性，以及其它多特异性抗体通常在广泛的临床和诊断应用中显示出巨大的潜力。存在有欧盟和美国批准用于治疗肿瘤疾病的两种双特异性抗体药物(Catumaxomab和Blinatumab)。由于其独特的特征，双特异性和多特异性抗体通常已经分期为对于下一代抗体治疗剂非常有吸引力的形式。

在临床研究领域中，已经在几篇出版物中描述了特异性抗体的诊断应用(例如Fanger等人，Crit.Rev.Immunol.1992,12:101-124；Nolan等人，Biochem.Biophys.Acta.1990，1040:1-11；Song-Sivilai等人，Clin Exp.Immunol.1990,79:315)。然而，双特异性抗体(BsAb)最令人印象深刻的应用在于免疫-肿瘤领域。理论上，BsAb的一个臂可以结合肿瘤细胞上的肿瘤抗原，BsAb的第二个臂可以结合免疫效应细胞标志物。因此，BsAb可以作为桥接剂(bridging agent)来募集免疫效应细胞(天然杀伤细胞或效应T细胞)并将其带到局部肿瘤部位以杀死肿瘤细胞。这些治疗应用已经描述于许多出版物中(Hseih-Ma等人，Cancer Res.1992,52:6832-6839；Weiner等人，Cancer Res.1993,53:94-100；Shalaby等人，J.Exp.Med.1992,175:217；Weiner等人，J.Immunol.1994,152:2385)。