[发明专利]多特异性抗体平台和相关方法

权利要求书

1.多特异性异二聚体抗体，其包含第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链，其中所述第一免疫球蛋白重链的CH3结构域包含SEQ ID NO:5，且所述第二免疫球蛋白重链的CH3结构域包含SEQ ID NO:7。

2.权利要求1的抗体，其中所述第一免疫球蛋白重链具有带正电荷的氨基酸取代并保留蛋白A结合活性；其中所述第二免疫球蛋白重链具有带负电荷的氨基酸取代并具有显著降低的蛋白A结合亲和力。

3.权利要求1的抗体，其中由于所述抗体中的两条免疫球蛋白重链的仅一条保留蛋白A结合活性，所述抗体呈现与野生型单克隆抗体相比降低的蛋白A结合亲和力，使得所述抗体可以在pH 4.0而不是pH 3.0从蛋白A柱洗脱。

4.权利要求1的抗体，其中所述第一和第二免疫球蛋白重链可与一个或两个结构域形成融合蛋白，该结构域选自Fab、ScFv、单克隆抗体、单价抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、抗体药物缀合物、单体(monobody)、双价抗体(diabody)、纳米抗体、抗体前体(probody)、酶促结构域、配体或受体融合蛋白。

5.权利要求1的抗体，其中所述抗体还包含一个或多个抗体轻链。

6.核酸载体，其包含编码权利要求1的抗体的第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列在相同的载体或单独的载体上，且其中编码所述第一免疫球蛋白重链和所述第二免疫球蛋白重链的核酸的比率可以变化。

7.权利要求6的载体，其中编码所述第一免疫球蛋白重链和所述第二免疫球蛋白重链的核酸的比率为1：1。

8.权利要求6的载体，其中所述第一链包含SEQ ID NO:6(OA)且所述第二链包含SEQ IDNO:8(OB)。

9.分离的多肽链，其包含多特异性抗体的CH3结构域，所述分离的多肽链包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:5和7。

10.药物组合物，其包含权利要求1的抗体。

11.权利要求1的抗体，其中所述抗体是人或人源化的IgG、IgA、IgM、IgE和IgD，或其亚类。

12.权利要求1的抗体，其中所述抗体是人或人源化的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。

13.抗体，其包含第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链，其中所述第一免疫球蛋白重链进行以下三氨基酸取代：(P395K，P396K，V397K)，且所述第二免疫球蛋白重链进行以下三氨基酸取代：(T394D，P395D，P396D)； 或其中所述第二免疫球蛋白重链进行以下三氨基酸取代：(P395K，P396K，V397K)， 且所述第一免疫球蛋白重链进行以下三氨基酸取代：(T394D，P395D，P396D)。

14.宿主细胞，其包含权利要求6的核酸载体。

15.制备权利要求1的抗体的方法，其中所述方法包括以下步骤：

a.修饰第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链中的氨基酸残基，

其中所述抗体的第一免疫球蛋白重链和所述第二免疫球蛋白重链之间的表达比率为约1:1；

c.培养表达所述第一免疫球蛋白重链和所述第二免疫球蛋白重链的细胞系以形成所述抗体；

d.从宿主细胞培养物纯化所述抗体。

16.药物组合物，其包含权利要求1的抗体和药学上可接受的载体。