[发明专利]裂殖壶菌WZYU011及其生产凝乳酶的方法

说明书

本发明公开了一种裂殖壶菌WZYU011及其生产凝乳酶的方法，将裂殖壶菌通过斜面培养、种子培养和发酵培养即可得到凝乳酶粗酶液。该方法首次使用裂殖壶菌在包含葡萄糖、蛋白胨、酵母粉和海盐等廉价原料的培养基中快速生产凝乳酶，避免了在培养基中另外添加钙和镁等无机盐，大大降低了生产成本；且整个工艺流程简单，设备要求低，可控性强，适用于工业化生产。利用本发明所述制备方法所得凝乳酶具有较高的酶活力,可以满足工业化生产凝乳酶的需求。

(一)技术领域

本发明涉及一种凝乳酶的制备，特别涉及一种利用裂殖壶菌生产凝乳酶的方法。

(二)背景技术

裂殖壶菌(Aurantiochytrium sp.)是一种海洋类真菌的异养型微生物，其细胞中富含DHA等重要多不饱和脂肪酸，已成为世界上最常用的DHA高产菌株。裂殖壶菌分布于海洋生境，能够利用自身的多酶体系高效分解环境基质，满足自身快速生长的需求，其数量级甚至超过细菌，而且作为分解者参与海洋环境物质循环，具有重要的生态学意义。

凝乳酶是奶酪生产中使牛奶凝固的关键酶，属于酸性蛋白酶，又称天冬氨酸蛋白酶，其产值占整个酶制剂总产值的15.5％，市场需求量巨大。凝乳酶的传统来源是哺乳期小牛的皱胃，因其具有较高的凝乳和蛋白水解能力而成为奶酪制作的首选酶。然而动物来源的酶成本昂贵，且提取程序和工艺较为复杂，已不能满足现代工业对于凝乳酶的要求。所以，研究者不断寻求新的凝乳酶资源。微生物具有生长速度快、生产成本低、占地面积小和易于控制生产条件等优点，而且微生物凝乳酶多属胞外酶，提取方便，使其具有较好的发展前景。目前微生物凝乳酶主要由米黑毛霉、微小毛霉和粟疫霉等霉菌通过固态发酵生产，霉菌容易产生菌丝体，影响产酶；另外与固态发酵相比，液态发酵技术具有发酵时间短、过程易于控制和产量高等优势。而关于裂殖壶菌来源的凝乳酶及其液态发酵生产的研究并未见报道。裂殖壶菌已通过FDA安全认证，中国卫生部也将其加入安全的食品添加剂名录，故广泛应用于食品和饲料工业。该菌能够利用廉价基质快速生长，很大程度上降低了其发酵产品的成本，有利于工业化生产。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种新菌株--裂殖壶菌(Aurantiochytrium sp.)WZYU011及利用裂殖壶菌WZYU011高效生产凝乳酶的方法。本发明首次使用已通过食品安全认证的海洋微生物裂殖壶菌，采用廉价原料高效生产凝乳酶，有效降低了凝乳酶的生产成本，且整个工艺流程简单，设备要求低，可控性强，适用于工业化生产。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株--裂殖壶菌(Aurantiochytrium sp.)WZYU011，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M 2016619，保藏日期为：2016年11月7日，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。

本发明还提供一种利用裂殖壶菌WZYU011生产凝乳酶的方法，所述方法为：将裂殖壶菌WZYU011接种至发酵培养基中，在25-35℃下，50-600rpm振荡培养，得到发酵液，将发酵液离心，弃细胞沉淀，得到含凝乳酶的粗酶液，将粗酶液分离纯化，获得凝乳酶；所述发酵培养基组成为：葡萄糖40-120g/L，酵母粉10-20g/L，蛋白胨5-20g/L，海盐20g/L，溶剂为水，pH值自然。

进一步，所述裂殖壶菌WZYU011接种前先进行斜面活化和种子扩大培养：(1)斜面培养：将裂殖壶菌WZYU011接种于斜面培养基上，25-35℃下培养1-3天；所述斜面培养基组成为：葡萄糖20g/L，酵母粉10g/L，蛋白陈5g/L，海盐20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH值自然；(2)种子培养：将斜面培养基上的菌体接入含100mL种子培养基的500mL三角瓶中，在25-35℃下，50-300rpm震荡培养1-3天，得到种子液；所述种子培养基组为：葡萄糖60g/L，酵母粉10g/L，蛋白陈5g/L，海盐20g/L，溶剂为水，pH值自然。