[发明专利]岩黄连茎的石蜡切片方法

说明书

本发明公开了一种岩黄连茎的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连茎放于体积浓度为0.8‑1.2％的番红溶液浸染8‑12h；在脱蜡之后，将载有岩黄连根的玻片进行复水，复水后再放于酒精溶液中进行分色，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800‑1000)的醋酸，最后放入体积浓度为0.8‑1.2％的固绿溶液中染色10‑20秒。本发明的岩黄连茎切片方法可切出结构清晰的岩黄连茎结构，标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本，可供岩黄连药材显微鉴别应用，供规范市场。

技术领域

本发明涉及组织学领域。更具体地说，本发明涉及一种岩黄连茎的石蜡切片方法。

背景技术

岩黄连(Corydalis saxicola Bunting)是罂粟科植物，为多年生草本植物，分布于我国广西、广东、福建、湖南等省。全草入药，全草含脱氢卡维丁(岩黄连碱)等活性成分；具有显著的抗菌、消炎、镇痛和强安定作用，并观察到有抑制肿瘤细胞作用；主治疮疖肿毒、肝炎、肝硬化、肝癌等症。是著名的壮瑶药品种，岩黄连植物分布局限于石灰岩山区，属石山特有种。由于生境条件恶劣，其自然繁殖率很低，种群发展困难，资源蕴藏量十分有限，加上其种子细小，繁殖比较困难，在引种栽培时较难成活，年来人们大量采挖和收购，导致了野生资源的供不应求，野生岩黄连资源濒临枯竭。随着日益攀升的市场价格，混淆品层出不穷，因此急需开发出岩黄连茎切片用以鉴别药材的真伪，供规范药材市场，鉴别真伪的岩黄连切片需要达到的效果为岩黄连茎部切片结构清晰，能明确分辨各组织结构等，且需要标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。常规切片技术步骤繁杂不统一，且制备出来的岩黄连茎部切片达不到要求无法适用于药材的鉴别。

发明内容

本发明的一个目的是解决现有技术制备的岩黄连根部切片不够清晰不能用于药材真伪鉴别的问题，并提供至少后面将说明的优点。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种岩黄连茎的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，包括：在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连茎放于体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液浸染8-12h；

在脱蜡之后，将载有岩黄连根的玻片进行复水，复水后再放于酒精溶液中进行分色，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800-1000)的醋酸，最后放入体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液中染色10-20秒。

优选的是，所述体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液是用2/3体积无水酒精+1/3体积TO型生物透明剂的混合液为溶剂配制而成，所述体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液是用体积浓度为95％的酒精溶液为溶剂配制而成。

优选的是，将载有岩黄连茎的玻片依次放入1/2体积型生物透明剂+1/2体积无水酒精混合液、无水酒精、无水酒精、体积浓度为95％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为70％酒精中复水，每级3-5秒；再放入50％酒精中分色，3-10秒；之后再依次放入体积浓度为70％酒精、体积浓度为85％酒精中进一步处理，每级3-10秒。

优选的是，固绿溶液染色后将载有岩黄连茎的玻片放于放入无水酒精中洗去染色剂，此级停留3-10秒；然后依次放入无水酒精、1/2TO型生物透明剂+1/2无水酒精混合液中，每级停留3-10秒；最后将载有岩黄连茎的玻片放入TO型生物透明剂中停留5-10分钟，此步骤重复三次。

优选的是，将固定后的岩黄连茎依次经过体积浓度为80％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为90％酒精、体积浓度为95％酒精逐级脱水，每个浓度梯度脱水45-60分钟，再放于100％酒精中脱水两次，每次30-45分钟。

优选的是，每个梯度浓度的酒精溶液在对岩黄连茎脱水过程中同时进行真空抽气10-15分钟。