[发明专利]岩黄连茎的石蜡切片方法

权利要求书

1.一种岩黄连茎的石蜡切片方法，包括样品固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与展片、脱蜡、染色以及封片，其特征在于，

固定之前，去除岩黄连茎表面浮尘，垂直其中脉横切为长5-10mm，宽3-5mm的茎段，再将茎段放入FAA固定液中固定，FAA固定液由体积浓度为70％酒精:冰醋酸:甲醛体积比为90:5:5配制而成；

将固定后的岩黄连茎依次经过体积浓度为80％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为90％酒精、体积浓度为95％酒精逐级脱水，每个浓度梯度脱水45-60分钟，再放于100％酒精中脱水两次，每次30-45分钟；每个梯度浓度的酒精溶液在对岩黄连茎脱水过程中同时进行真空抽气10-15分钟；

在透明步骤之前，将脱水后的岩黄连茎放于体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液浸染8-12h；所述体积浓度为0.8-1.2％的番红溶液是用2/3体积无水酒精+1/3体积TO型生物透明剂的混合液为溶剂配制而成，所述体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液是用体积浓度为95％的酒精溶液为溶剂配制而成；

在脱蜡之后，将载有岩黄连根的玻片进行复水，将载有岩黄连茎的玻片依次放入1/2体积型生物透明剂+1/2体积无水酒精混合液、无水酒精、无水酒精、体积浓度为95％酒精、体积浓度为85％酒精、体积浓度为70％酒精中复水，每级3-5秒；

复水后再放入50％酒精中分色，3-10秒，同时向用于分色的酒精溶液中加入体积比为1/(800-1000)的醋酸；之后再依次放入体积浓度为70％酒精、体积浓度为85％酒精中进一步处理，每级3-10秒；最后放入体积浓度为0.8-1.2％的固绿溶液中染色10-20秒；

在岩黄连茎番红染色过程中，染色第1小时后对放有岩黄连茎的0.8-1.2％番红溶液用超声频率为32-35kHz的超声波进行超声处理60-75秒，染色第3小时后，对放有岩黄连茎的0.8-1.2％番红溶液用超声频率为28-31kHz的超声波进行超声处理45-60秒，染色第7小时后，对放有岩黄连茎的0.8-1.2％番红溶液用超声频率为25-27kHz的超声波进行超声处理30-50秒；

用于进一步处理的70％酒精和85％酒精中分别加入体积比为1/(1000-1200)的柠檬酸、苦味酸以及草酸的混合溶液，其中混合溶液中柠檬酸：苦味酸：草酸的体积比为1:2:1。

2.如权利要求1所述的岩黄连茎的石蜡切片方法，其特征在于，固绿溶液染色后将载有岩黄连茎的玻片放于放入无水酒精中洗去染色剂，此级停留3-10秒；然后依次放入无水酒精、1/2TO型生物透明剂+1/2无水酒精混合液中，每级停留3-10秒；最后将载有岩黄连茎的玻片放入TO型生物透明剂中停留5-10分钟，此步骤重复三次。

3.如权利要求1所述的岩黄连茎的石蜡切片方法，其特征在于，对番红溶液染色后的茎依次用1/2体积无水酒精+1/2体积TO型生物透明剂混合液以及1/3体积无水酒精+2/3体积TO型生物透明剂混合液进行透明处理，每级透明时间均为60-120分钟；再放于纯TO型生物透明剂中浸泡2次，每次浸泡60-120分钟。