[发明专利]用于从母体捕获和分离胎儿细胞的无创方法和试剂盒

说明书

本发明涉及用于从母体捕获和分离胎儿细胞的无创方法和试剂盒。具体来说，本发明涉及胎儿滋养层细胞特异性表达基因的启动子和胎儿有核红细胞特异性表达基因的启动子，以及重组I型单纯疱疹病毒，所述重组I型单纯疱疹病毒剔除了与致病性相关的基因片段，并且将病毒基因组ICP野生型启动子替换为胎儿滋养层细胞特异性表达基因或有核红细胞特异性表达基因的启动子，并且其中插入了用于示踪重组I型单纯疱疹病毒的标记物。

技术领域

本发明提供了一种新型的产前筛查和检测方法和试剂盒，特别是涉及一种可以在妊娠早期实现胎儿细胞的捕获和分离的无创方法和试剂盒，从而降低生育染色体疾病或者基因异常患儿的风险。

背景技术

妊娠早期进行产前诊断以检测胎儿的基因或者染色体异常等遗传缺陷非常重要。目前，广泛使用的三种产前筛查检测方法主要为：羊水穿刺术、绒毛膜绒毛取样术以及胎儿游离DNA(cfDNA)检测。但是，目前的这三种技术都存在着一定的局限性。羊水穿刺术和绒毛膜绒毛取样术都是侵入性技术，有一定的致胎儿流产率和/或导致胎儿损伤。此外，羊水穿刺术和绒毛膜绒毛取样术都只能在孕期较晚的时间(8-20周或以上)才能进行筛查和检测。

利用母体血液样品来实施胎儿的产前筛查将是非常有利的选择。只有非常有限数量的胎儿细胞存在于母体血液中阻碍了将母体循环中的胎儿细胞用于产前筛查目的的可行性。胎儿cfDNA检测是最近建立起来的利用母体外周血的非侵入性产前检测诊断技术，然而这项技术无法可靠地检测到胎儿基因组中的微小变化，尤其是一些导致严重疾病或发育障碍的基因缺失。母体外周血中胎儿cfDNA含量极少，也给筛查检测结果带来了一定的不稳定性。

现有的产前筛查检测方法具有检测窗口期较晚、存在一定的检测危险性、检出率低以及检测灵敏度差的缺点。因此，急需一种能在妊娠早期准确、灵敏、快速并且特异性地从母体体液捕获和分离胎儿细胞从而能对胎儿的染色体和基因进行检测实现早期产前筛查的方法和试剂盒。尤其是需 要从母体血液样品中分离胎儿细胞的改进方法以帮助产前筛查。

发明内容

本发明就是基于重组I型单纯疱疹病毒在胎儿滋养层细胞或有核红细胞细胞中的特异性生长增殖，所述重组I型单纯疱疹病毒剔除了ICP34.5的基因，并将病毒基因组ICP4野生型启动子替换为胎儿滋养层细胞或有核红细胞特异性表达基因的启动子，并且在剔除所述基因的位置插入了荧光蛋白表达盒以便于示踪。因此，本发明首次提出构建重组I型单纯疱疹病毒用于从母体体液捕获和分离胎儿细胞，用于妊娠期，尤其是妊娠早期无创的产前筛查和检测。

本发明的发明人通过对胎儿细胞及母体细胞基因表达谱的分析，筛选出20个胎儿滋养层细胞特异性表达而母体细胞不表达的基因，以及3个胎儿有核红细胞特异性表达而母体细胞不表达的基因。用上述基因的启动子活性调控重组病毒的表达复制可以实现重组I型单纯疱疹病毒在胎儿滋养层细胞或胎儿有核红细胞中特异性地复制增殖，而在母体任何细胞内都不复制增殖。

第一方面，本发明提供了胎儿滋养层细胞特异性表达基因的启动子。优选地，所述启动子为选自SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:20的任一项的启动子，或与选自SEQ ID NO:1-SEQID NO:20的任一项的启动子有至少80％，优选至少90％，优选至少95％，优选至少98％，优选至少99％同一性的启动子序列。

第二方面，本发明提供了胎儿有核红细胞特异性表达基因的启动子。优选地，所述启动子为选自SEQ ID NO:21-SEQ ID NO:23的任一项的启动子，或与选自SEQ ID NO:21-SEQ ID NO:23的任一项的启动子有至少80％，优选至少90％，优选至少95％，优选至少98％，优选至少99％同一性的启动子序列。