[发明专利]用于从母体捕获和分离胎儿细胞的无创方法和试剂盒

权利要求书

1.重组I型单纯疱疹病毒，其特征在于所述病毒剔除了与致病性相关的ICP34.5基因，并且将病毒基因组ICP4野生型启动子替换为通过对比胎儿与母体细胞的基因表达谱，筛选得到的胎儿细胞特异性表达基因的启动子，所述启动子为胎儿滋养层细胞特异性表达基因或有核红细胞特异性表达基因的启动子，并且其中插入了用于示踪重组I型单纯疱疹病毒的标记物，其特征在于所述胎儿滋养层细胞特异性表达基因的启动子为选自SEQ ID NO:1-SEQ ID NO: 20的任一项的启动子，并且所述胎儿有核红细胞特异性表达基因的启动子为选自SEQ ID NO: 21-SEQ ID NO: 23的任一项的启动子。

2.根据权利要求1的重组I型单纯疱疹病毒，其特征在于所述重组I型单纯疱疹病毒中在剔除ICP34.5基因的位置处插入了荧光蛋白表达盒。

3.根据权利要求2的重组I型单纯疱疹病毒，其特征在于所述荧光蛋白表达盒选自绿色荧光蛋白表达盒、青色荧光蛋白表达盒、红色荧光蛋白表达盒和黄色荧光蛋白表达盒。

4.一种用于制备重组I型单纯疱疹病毒的方法，所述方法包括如下步骤：(1)将野生型I型单纯疱疹病毒株的基因组ICP4野生型启动子替换为胎儿滋养层细胞的启动子或有核红细胞特异性表达基因的启动子；(2)从野生型I型单纯疱疹病毒株中剔除ICP34.5基因；以及(3)在基因组中插入荧光蛋白表达盒；

其特征在于所述胎儿滋养层细胞特异性表达基因的启动子为选自SEQ ID NO: 1-SEQID NO: 20的任一项的启动子，以及所述胎儿有核红细胞特异性表达基因的启动子为选自SEQ ID NO: 21-SEQ ID NO: 23的任一项的启动子。

5.根据权利要求4的用于制备重组I型单纯疱疹病毒的方法，其特征在于所述野生型I型单纯疱疹病毒株为野生型I型单纯疱疹病毒17+株。

6.一种用于制备重组I型单纯疱疹病毒的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：(1)提取野生I型单纯疱疹病毒株的全长病毒DNA；(2)构建胎儿滋养层细胞或胎儿有核红细胞特异性表达基因的启动子连接ICP4基因的质粒；(3)构建ICP4稳定表达的BHK-ICP4细胞株；(4)构建插入了荧光蛋白表达盒eGFP，并且含有ICP4基因上游侧翼区序列和下游侧翼区序列的质粒；(5)构建剔除ICP4基因的重组I型单纯疱疹病毒；(6)构建替换ICP4基因野生型启动子的重组I型单纯疱疹病毒；(7)提取步骤(6)获得的重组I型单纯疱疹病毒的全长病毒DNA；(8)构建含有ICP34.5基因上游侧翼区序列和下游侧翼区序列的质粒；以及 (9)构建剔除ICP34.5基因的重组I型单纯疱疹病毒，

其特征在于所述胎儿滋养层细胞特异性表达基因的启动子为选自SEQ ID NO: 1-SEQID NO: 20的任一项的启动子，以及所述胎儿有核红细胞特异性表达基因的启动子为选自SEQ ID NO: 21-SEQ ID NO: 23的任一项的启动子。