[发明专利]一种抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于医学生物类免疫检测试剂领域，具体涉及一种抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒及其使用方法。

背景技术

链球菌溶血素O是A群溶血性链球菌的代谢产物，它是一种具有溶血活性的蛋白质，并且是一种强抗原物质。人感染溶血性链球菌2～3周后，即可产生抗链球菌溶血素O(ASO)。此种抗体的显著递增与急性风湿热、急性肾小球肾炎、风湿性心脏病、风湿性关节炎或急性肾脏病变等密切相关，持续存在或水平下降则提示疾病为非活动期或恢复期，临床动态监测ASO具有重要意义。

目前常用的检测ASO的方法有：1)点免疫结合法、2)溶血抑制法、3)胶乳凝集法、4)酶联免疫法、5)胶乳增强免疫比浊法。

其中，点免疫结合法以硝酸纤维素薄膜为固相载体，把链球菌溶血素O抗原点在硝酸纤维素薄膜上，未点抗原的部分用吐温20封闭，固定在硝酸纤维素薄膜上的抗原与被检测血清中的抗链球菌溶血素O抗体反应，然后再与过氧化物酶标记的马抗人免疫球蛋白IgG反应，过氧化物酶的存在与否则用含有盐酸联苯胺和过氧化氢的底物检测，阳性反应点上由于形成有色的沉淀而把硝酸纤维素薄膜染成蓝褐色。可通过目测判断反应结果，但该方法只能定性不能进行定量。

溶血抑制法依据还原剂助溶血素O能溶解红细胞的特性，通过观察ASO中和溶血素O的溶血作用，定量检测ASO，该方法较敏感，但操作繁琐，试验影响因素较多，结果重复性欠佳。

胶乳凝集法依据被测血清中若有高滴度的ASO，在与ASO胶乳反应时会引起后者凝集，如预先用25结合单位/ml溶血素“O”中和后，不出现凝集者说明血清中ASO＜250单位，为阴性，仍出现凝集者说明血清中的ASO＞250单位，为阳性，但其灵敏度低，特异性差，假阳性率高，已远不能满足临床诊断、治疗及预后的需要。

酶联免疫法依据抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物显色，用酶标仪测定吸光度，通过标准曲线计算样品中抗链球菌溶血素O抗体的含量，但该方法重复性较差，精密度较低，且容易受到酶稳定性的影响。

胶乳增强免疫比浊法可定量测定血清中ASO含量，是当前国内外检测ASO常用的手段，该方法以大小均一且表面包被有链球菌溶血素O的聚苯乙烯乳胶颗粒悬液为检测试剂，当含有ASO的样品与该试剂混合时，发生明显的抗原-抗体凝集反应，通过测定570nm处吸光度值的变化，计算出样品中ASO抗体的含量。如公开号为CN 104483492A的中国专利申请公开了一种抗链球菌溶血素O抗体的检测试剂盒，该试剂盒首先利用化学交联法将惰性蛋白(牛血清白蛋白)与链球菌溶血素O结合，制得稳定性好的组合蛋白，再利用化学交联法将组合蛋白与胶乳颗粒进行交联，制成链球菌溶血素O-牛血清白蛋白-胶乳颗粒复合物，通过检测抗原抗体之间的免疫反应形成的浊度，定量检测ASO的含量。采用胶乳增强免疫比浊法对ASO进行检测，具有重复性好，自动化程度高，操作简便快速，但其检测的灵敏度和检测特异性有待提高。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，采用该试剂盒进行抗链球菌溶血素O检测具有较高的灵敏度和特异性，且操作简单，操作流程短。

本发明另外一个目的在于提供一种所述抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒的使用方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其包含样本处理液、反应缓冲液、胶体金标记稳定液、标准品、清洗液。

其中，所述的胶体金标记稳定液为含2～8％(w/v)三羟甲基甲胺基乙磺酸、0.02～0.1％(w/v)叠氮化钠、0.1～0.2％(w/v)吐温-20、2～6％(w/v)海藻酸钠、1～2％(w/v)甘氨酸的胶体金标记链球菌溶血素O溶液。

进一步地，所述的胶体金标记链球菌溶血素O溶液的制备包括以下步骤：

(1)胶体金的制备：

①取100mL质量浓度为0.01％的四氯金酸水溶液与1mL聚乙二醇4000混合，加热至沸腾，保持沸腾3min，在1000r/min搅拌速度下，迅速加入2mL还原剂溶液，在搅拌下继续加热，直至溶液变成成橘红色为止，冷却，即得胶体金溶液；