[发明专利]一种抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含样本处理液、反应缓冲液、胶体金标记稳定液、标准品、清洗液。

2.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的胶体金标记稳定液为含2～8％(w/v)三羟甲基甲胺基乙磺酸、0.02～0.1％(w/v)叠氮化钠、0.1～0.2％(w/v)吐温-20、2～6％(w/v)海藻酸钠、1～2％(w/v)甘氨酸的胶体金标记链球菌溶血素O溶液。

3.根据权利要求2所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的胶体金标记链球菌溶血素O溶液的制备包括以下步骤：

(1)胶体金的制备：

①取100mL质量浓度为0.01％的四氯金酸水溶液与1mL聚乙二醇4000混合，加热至沸腾，保持沸腾3min，在1000r/min搅拌速度下，迅速加入2mL还原剂溶液，在搅拌下继续加热，直至溶液变成成橘红色为止，冷却，即得胶体金溶液；

②取20mL含25mmol/L EDTA，质量分数为75％的蔗糖溶液置于50mL的离心管中，然后加入10mL含25mmol/L EDTA，质量分数为50％的蔗糖溶液，静置10min，然后取10mL步骤①制得的胶体金溶液缓慢加入到离心管中，平衡后在4℃，2000r/min离心15～20min，收集处于75％的蔗糖与50％的蔗糖界面中的胶体金，即得；

(2)胶体金标记链球菌溶血素O溶液的制备：

①链球菌溶血素O用量确定：取1mL步骤(1)制得的胶体金，使用0.1mol/L的醋酸溶液调节pH至7.5～8.5，加入0.1mL 10％的氯化钠溶液，混匀，然后加入不同体积的链球菌溶血素O溶液，混匀，静置1h，观察是否有颜色改变或沉淀析出，当出现由红变蓝的聚沉现象，表明加入的链球菌溶血素O的用量不足，当无颜色改变且无沉淀析出，表明加入的链球菌溶血素O的用量为制备胶体金标记链球菌溶血素O溶液所需的链球菌溶血素O稳定用量；

②胶体金标记链球菌溶血素O溶液的制备：取10mL步骤(1)制得的胶体金，使用0.1mol/L的醋酸溶液调节pH至7.5～8.5，加入1mL 10％的氯化钠溶液，加入10倍步骤①确定的制备胶体金标记链球菌溶血素O溶液所需的链球菌溶血素O稳定用量，混匀，反应10min，然后将反应液使用Sephadex G-200柱进行纯化，即得胶体金标记链球菌溶血素O溶液。

4.根据权利要求3所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述步骤(1)胶体金的制备中还原剂溶液的制备为：取10mL质量浓度为1％的抗坏血酸、6mL质量浓度为1％的鞣酸、1mL 0.2mol/L碳酸氢钾溶液和2mL双蒸水，混合，即得。

5.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的反应缓冲液组成为：4～12％(w/v)2-(N-吗啡啉)乙磺酸、2～4％(w/v)BSA、0.1～0.2％(w/v)吐温-20、0.01～0.1％(w/v)叠氮化钠、1～2％(w/v)乙二醇和2～8％(w/v)PEG6000。

6.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的样本处理液为含有0.05～0.1％(w/v)乙二胺四乙酸钠、0.5～1％(v/v)Triton X-100、0.05～0.1％(w/v)Proclin 300、且浓度为0.05mol/L、pH为7.2的磷酸盐缓冲溶液。

7.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的清洗液组为含0.1％(w/v)吐温-20、0.1mol/L氯化钠，且浓度为0.05mol/L、pH为7.2的磷酸盐缓冲溶液。

8.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒，其特征在于，所述的标准品的制备为：

使用含0.1mol/L氯化钠、2％(w/v)BSA，pH为7.2的磷酸盐缓冲溶液将链球菌溶血素O抗体配制成浓度分别为5，25，50，125，250，500ng/ml的标准液，即得。

9.根据权利要求1-8任一所述的抗链球菌溶血素O快速诊断试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取2.5μL校准品，加入150μL反应缓冲液，混匀，于37℃恒温5min，然后向混合体系中加入30μL胶体金标记稳定液，混匀，于37℃恒温5min，空白管调零，在检测波长为540±10nm、检测温度为37℃的条件下测定吸光度，根据不同浓度校准品测得的吸光度值和相应的浓度值制定标准曲线；

(2)取2.5μL待测样品，按照步骤(1)的条件进行吸光度测定，将测得的吸光度值代入标准曲线，对应的浓度值即为待测物的浓度。