[发明专利]一种筛选新型脂肪酸合成抑制剂的方法

说明书

本发明涉及一种高效、快速的筛选脂肪酸合成抑制剂的方法。利用产油微生物作为一个有效的工具从植物提取物、天然产物以及各种化合物中筛选出新型的脂肪酸合成抑制剂。用液体方法培养产油微生物，将培养活化的菌种及其培养液等量加入微孔板中。在相应微孔中加入颜色指示剂来观测脂质的合成情况，运用图像分析软件来分析图片。本发明用已知的脂肪酸合成抑制剂(C75，Cerulenin)作为对照组。同时可测量蛋白量以及生物量确保所筛选的抑制剂对菌体的正常生长影响很小。脂肪酸合成抑制剂的寻找对于治疗脂肪相关疾病如肥胖、癌症具有一定的帮助，本发明为筛选脂肪酸合成抑制剂提供了一个快速有效的新方法。

技术领域

本发明属于药物筛选领域，特别涉及一种利用产油微生物为模型筛选脂肪酸合成抑制剂的方法。

背景技术

在体内各组织中，脂肪酸的合成参与细胞增殖、分化和机体能量代谢、脂类代谢等重要生命活动。在脂肪组织，脂质物质的主要合成场所肝脏，以及多种脂质合成密切相关的癌症如乳腺癌、前列腺癌组织中脂肪酸合成相关酶都高度表达。因此，抑制脂肪酸的合成成为治疗肥胖及肿瘤的新靶点。

至今，已批准上市并用于临床治疗肥胖的药物仅有三种。即5-羟色胺去甲肾上腺素重摄取抑制剂——西布曲明、选择I型大麻受体拮抗剂——利莫那班和胰脂肪酶抑制剂——奥利司他。这些药物对肥胖症有较好的疗效，但也会产生一些副作用。因此，为了研究开发出副作用小、安全性高，更符合肥胖患者需求的脂肪酸抑制剂，有必要建立一种高效、快速、简单的脂肪酸合成抑制剂筛选方法。

目前，筛选脂肪酸合成抑制剂可以使用细胞实验或动物实验来完成。但是该手段培养周期长、条件严格、费用相对较高。因此建立一个高效、准确筛选脂肪酸合成抑制剂的体外方法是十分必要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种适合于在体外环境中，直观、快速、高效、低成本的筛选脂肪酸合成抑制剂的方法，该方法利用产油微生物作为一个有效的工具从植物提取物、天然产物以及各种化合物中筛选出新型的脂肪酸合成抑制剂，同时可测量蛋白量以及生物量确保所筛选的抑制剂对菌体的正常生长影响很小。脂肪酸合成抑制剂的寻找对于治疗脂肪相关疾病如肥胖、癌症具有一定的帮助。

为达到上述目的，提供以下技术方案：

本发明所述筛选脂肪酸合成抑制剂的方法，是以产油微生物为工具，经过培养活化后，等量加入微孔板中，同时在相应的微孔中加入脂质染色剂以及所要筛选的抑制剂，培养一段时间后观察并用图像分析软件以及分光光度计或酶标仪对微孔显色结果进行分析，染色越浅的微孔对应的脂肪酸合成抑制剂的抑制效果越好。

该方法中，微孔的染色深度直观地显示了相应的微孔在培养一段时间后脂肪酸的含量，通过对显色结果分析，可知染色越浅的微孔对应的脂肪酸合成抑制剂的抑制效果越好。

在具体操作时，本发明所述筛选脂肪酸合成抑制剂的方法，包括以下步骤：

1)产油微生物活化培养，并用打碎机打匀菌液；

2)将步骤1)中所述活化的菌液等量加入微孔板中，在实验组中等量加入将要筛选的抑制剂，在对照组和实验组中等量加入染色剂；

3)将步骤2)中所述微孔板中的菌体培养72小时后肉眼观察结果，将有明显颜色变化的筛选抑制剂用图像分析软件及酶标仪对显色结果进行分析，染色越浅的微孔对应的脂肪酸合成抑制剂的抑制效果越好。

上述的方法中，还包括步骤4)将筛选出的抑制剂加入菌体培养基培养菌体，检测生物量、蛋白量的变化，检测抑制剂对菌体正常生长情况的影响。

上述的方法中，步骤1)中产油微生物可以是高山被孢霉、裂殖壶菌、卷枝毛霉中的至少一种；且所述产油微生物采用液体培养基培养。