[发明专利]利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，尤其是涉及一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法。

背景技术

水蛭，俗名蚂蟥，在《神农本草经》中已有记载，具有很高的药用价值；在内陆淡水水域内生长繁殖，是中国传统的特种药用水生动物，其干制品泡制后中医入药，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病方面具有特效，随着水蛭药用价值的深度开发，其市场需求潜力巨大。

现有技术中，水蛭素，主要是从吸血水蛭的唾液中分离提纯出来，发现现有技术中提取水蛭素的方法存在以下缺陷：首先，现有的活体提取方法对水蛭素的提取量低。水蛭的耐饥饿能力较强，一次吸饱血后能够多天甚至数月不进食，水蛭只有在进食的过程会分泌大量分泌液，分泌液中含有高含量的水蛭素，而现有的活体提取技术水蛭分泌的分泌液量较少。

所以亟需一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，用于制备水蛭素，用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，通过该利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法所制得的水蛭素，水蛭素是采用水蛭为原料，按一定工艺制成的水蛭素,该水蛭素可提高五脏功能，增强身体健康水平，心脑血管疾病患者使用这种水蛭素，可有效用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。

根据本发明的一个方面，提供了利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法，包括以下步骤：

步骤一，选取30-40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4-5cm，再向水中滴加5-10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7-8天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:(4-6)进行混合后放入超声振荡仪，以150-200W功率超声振荡40-60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A，

步骤二，将步骤一所得到的备用液A置于容器内，往容器内添加维生素8-10g，调整pH 5.0-7.0，灭菌后，得到备用液B，

步骤三，将备用液B装进装有TB培养基的发酵罐中，发酵罐中装有TB培养基，然后加入乳糖，使乳糖浓度达到4-6mg/ml，然后无氧发酵50-80h，获得发酵液，过滤备用，

步骤四，将步骤三所得到的发酵液加蜂蜜3-8g进行调味，即得水蛭素。

进一步，所述TB培养基由蛋白胨10-12g、酵母提取物10-15g、甘油4-6ml组成，各组分溶解后高压灭菌，冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mol/L的磷酸二氢钾和0.72mol/L磷酸氢二钾的溶液。

进一步，所述步骤二中维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的混合物。

进一步，所述步骤二中维生素为维生素A、维生素C、维生素H、维生素PP和维生素T的质量比为(1-2)：(2-3)：(1-2)：(1-3)：(3-4)。

进一步，所述步骤一中饥饿处理的温度控制在80-90℃。

进一步，所述步骤三无氧发酵的温度为32-40℃。

进一步，所述步骤一，选取40只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到5cm，再向水中滴加10ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理8天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:6进行混合后放入超声振荡仪，以200W功率超声振荡60min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A。

进一步，所述步骤一，选取30只水蛭放入烧杯中，向烧杯中加水直至水深达到4cm，再向水中滴加5ml花生油，搅拌均匀后静置饥饿处理7天，再将处理后的水蛭取出，将所得到的水蛭和甘油质量比为1:4进行混合后放入超声振荡仪，以150W功率超声振荡40min，过滤分离去除滤渣，得到备用液A。

本发明的利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法为口服药物，服用方法：每日一次，每次取10-13ml冲水50-60ml进行稀释，饭后30分钟温服。

有益效果：本发明中采用水蛭为原料，按一定工艺制成的水蛭素,该水蛭素可提高五脏功能，增强身体健康水平，心脑血管疾病患者使用这种水蛭素，可有效用于治疗心脑血管疾病，减轻心脑血管疾病患者的痛苦。

具体实施方式

实施例1

本实施例中利用微生物发酵催化制备水蛭素的方法,包括以下步骤：