[发明专利]检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法，所述试纸条包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光微球标记的cTnI单克隆检测抗体，所述包被膜包括平行设置、且相互间隔的检测区和对照区，所述检测区包被有识别单一抗原表位的cTnI单克隆捕获抗体，所述对照区包被有羊抗鼠IgG抗体；所述包被膜为结合聚合物的硝酸纤维膜，所述聚合物为在小于450nm波长具有10％以下透光率，在500nm波长以上具有95％以上的透光率的材料。本发明的试纸条，可以快速定量检测，试验结果准确可靠，灵敏度高，制备方法简单，适合大规模生产，对cTnI定量检测有积极意义。

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体地说，本发明涉及一种定量检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法。

背景技术

肌钙蛋白是肌肉收缩的调节蛋白。心肌肌钙蛋白(cTn)是由三种不同基因的亚基组成：心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌钙蛋白C(TnC)。目前，用于ACS实验室诊断的是cTnT和cTnI。由于cTnI与骨骼肌中的异质体分别由不同基因编码，具不同的氨基酸顺序，有独特的抗原性，故它的特异性要明显优于CK-MB同工酶。心肌以外的肌肉组织出现损伤或疾病时，CK和CK-MB可能会升高，而cTnI则不会超过其临界值。由于它们在正常血清中含量极微，在AMI时明显增高，且增高倍数一般都超过总CK和CK-MB的变化。cTnI由于分子量小，发病后游离的cTn从心肌细胞浆内迅速释放人血，血中浓度迅速升高，其时间和CK-MB相当或稍早。虽然肌钙蛋白半寿期很短(游离cTnI的半寿期据报道为2h～5d不等)，但其从肌原纤维上降解的过程持续时间很长，可在血中保持较长时间的升高，故它兼有CK-MB升高较早和LD1诊断时间窗长的优点。故目前cTn已有逐渐取代酶学指标的趋势。

肌钙蛋白的测定主要采用双抗体夹心的免疫学方法，检测方法则包括:

1、双抗夹心免疫化学发光法——该法操作简便，特异性强，敏感性高。

2、金标法——该法具有快速简便，易观察的特点，但是灵敏度不高。

3、透射免疫浊度法——该测定方法简便、快速，可自动化，适合于批量检测，但是免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需做进一步的验证。

早期测得的肌钙蛋白一般是以游离形式存在于细浆中的很少部分的肌钙蛋白I和肌钙蛋白T，随着心肌细胞进一步坏死，肌纤维上肌钙蛋白I和肌钙蛋白T不断崩解排入外周循环，这个时间段大概要4个小时。

从生理角度出发心肌细胞也在不断新陈代谢，正常衰老和凋亡不可避免，同时机体亚健康状态比如长时间运动、发热、甲状腺功能异常、肾功能受损都可以导致心肌微损害，短暂可逆的心肌缺血、缺氧如冠脉痉挛、冠心病心绞痛这些因素都可以引起血液中肌钙蛋白I、T的微量升高，过于敏感的诊断指标并不利于心梗诊断。

传统肌钙蛋白检测方法无法改变心肌坏死后肌钙蛋白需要延迟一段时间才大量排入外周循环的病理生理学特征，所以不断提高检测敏感度，没有多少实用性。肌钙蛋白无法像心电图能够在更早期捕捉到心肌梗死的信息。

时间分辨免疫层析POCT最主要特点是强调出结果快速，大大缩短了实验结果周转时间。对于急诊治疗和抢救的病人，这些病人往往情况危急且病因不明，而传统的临床检验室测量时间一般要15分钟以上，POCT一般在5分钟以内即可完成测试，医生根据POCT提供的信息，对病人及时作出初步诊断并拟定救治方案，必将减少住院时间，降低发病率/死亡率，产生很大的社会效益和经济效益。同时对于一些需要长期监控的慢性病，如糖尿病的病人可以方便地按照医生的要求由病人自己或家属进行血糖和尿糖的监控。