[发明专利]检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光微球标记的cTnI单克隆检测抗体，所述包被膜包括平行设置、且相互间隔的检测区和对照区，所述检测区包被有识别单一抗原表位的cTnI单克隆捕获抗体，所述对照区包被有羊抗鼠IgG抗体；所述包被膜为结合聚合物的硝酸纤维膜，所述聚合物为在小于450nm波长具有10％以下透光率，在500nm波长以上具有95％以上的透光率的材料；所述聚合物为聚苯乙烯丙烯腈和聚碳酸酯的一种或两种。

2.根据权利要求1所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述识别单一抗原表位的cTnI单克隆捕获抗体和羊抗鼠IgG抗体的浓度分别为1-1.5mg/ml和0.3-0.5mg/ml，在所述包被膜上的包被量均为1-1.5ul/cm。

3.根据权利要求1所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫为硝酸纤维膜，所述荧光微球为Eu³⁺镧系元素荧光微球。

4.根据权利要求3所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球的直径为290nm-350nm。

5.根据权利要求1所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测区靠近所述结合垫，所述对照区靠近所述吸水纸，所述检测区和所述对照区的间隔为0.3-0.5cm。

6.根据权利要求1-5任一项所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条，其特征在于，检测区包被有识别单一抗原表位的cTnI单克隆捕获抗体的包被方法如下：

使用含有5％蔗糖的0.02mol/L的pH为7.2-7.6的磷酸盐缓冲液，分别将识别单一抗原表位的cTnI单克隆捕获抗体和羊抗鼠IgG抗体稀释到1.5mg/ml的浓度，使用定量喷膜仪以1ul/cm的量将二者以0.5cm的间隔喷于硝酸纤维素膜上，50℃烘干5h。

7.权利要求1-6任一项所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、在包被膜上分别固定识别单一抗原表位的cTnI单克隆捕获抗体和羊抗鼠IgG抗体，形成检测区和对照区；

(2)、制备荧光微球标记的cTnI单克隆检测抗体，并喷涂在结合垫上；

(3)、在底衬上搭接粘贴样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，即得。

8.根据权利要求7所述的检测cTnI的时间分辨免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述荧光标记的cTnI单克隆检测抗体的制备方法包括如下步骤：

(1)、在4℃下，采用0.02-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸盐缓冲液将cTnI单克隆检测抗体透析过夜，再将透析后的cTnI单克隆检测抗体调整至浓度为2-4mg/ml；

(2)、使用0.01-0.05mol/L的pH6.0的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，使微球终浓度为0.2mol/L，室温反应15-30分钟，充分洗涤微球，用0.02-0.05mol/LpH7.4-7.6的硼酸缓冲液复溶；

(3)、按cTnI单克隆检测抗体与微球的质量比为1:5-6的比例，在复溶后的微球中加入cTnI单克隆检测抗体，室温反应2小时，加入含有5％BSA的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液，室温反应30分钟，洗涤，再用含有0.5％BSA，0.05％Tween-20的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液复溶至原体积，使用定量喷膜仪以4ul/cm的量喷涂于玻璃纤维膜上，避光，烘干即得。

9.一种检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括塑料卡壳、权利要求1～6任一项所述的试纸条、以及设置于塑料卡壳内的缓冲液袋。

10.根据权利要求9所述的检测cTnI的时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为含有0.5％的BSA、0.05％的吐温20、0.1-1％还原剂的PBS缓冲液；所述还原剂为还原型谷胱甘肽或抗坏血酸。