[发明专利]基于UPLC/LTQ‑OrbitrapVelosMS检测石斛生物碱成分的方法

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体涉及基于UPLC/LTQ-Orbitrap Velos MS技术对石斛中生物碱成分的检测方法。

背景技术

石斛为常用名贵中药材，具有滋阴清热、益胃生津、润肺止咳等功效。生物碱是石斛药材中最重要的活性成分之一，在抗肿瘤、治疗心血管及胃肠道疾病等方面具有明显的疗效。为明确药效成分，对石斛中生物碱进行深入的化学成分分析具有重要意义。

目前，石斛中研究较多的是总生物碱含量，例如徐宁等人报道了采用分光光度法对石斛中总生物碱含量进行了测定，但是该方法主要是对石斛中生物碱进行定量检测，并且是对总生物碱的量进行的检测，无法区分不同生物碱的种类。

UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术是一种较为有效地、可靠地分析化合物成分的技术，例如，谢彤等人报道了基于UPLC/LTQ-Orbitrap-MS的黄芩中黄酮碳苷的结构表征及黄酮碳苷类成分的同分异构体的区分，为其他中药的成分分析提供参考。另外，牛增元等人报道了采用UPLC-LTQ/Orbitrap MS技术测定化妆品中抗生素、激素、邻苯二甲酸酯、农药以及孔雀石绿和结晶紫等5大类共89种化合物，说明该方法简便、快速、可靠性高。但是该技术依托于待检测样品需经过精细的预处理过程，去除待测物中杂质的干扰才能得到目标物的分析结果。由于UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术非常灵敏，前期预处理过程中如果没有完全去除非目标物，则容易造成分析产生误差或错误的结论，因此，样品的前期预处理是十分重要。

现有技术中，虽然有学者报道对丹参、黄芩等样品进行预处理后采用U PLC/LTQ-Orbitrap-MS技术对目标物进行检测，但是，从丹参中提取鉴定丹参酮ⅡA及丹酚酸B，前期过程需要克服糖类脂类的物质的干扰；从黄芩中分离检测黄酮碳苷，提取的目的物为糖类，干扰物为蛋白脂类等物质，可见目的物的提取方法不能通用。现有技术中，还没有针对UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技术对石斛中生物碱的种类进行预处理方法的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供基于UPLC/LTQ-Orbitrap Velos MS技术对石斛中生物碱成分的检测方法，使所述方法具有快速、准确、批量检测的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了基于UPLC/LTQ-Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法，包括以下步骤：

1)将石斛待测样品杀青后烘烤；

2)将所述步骤1)烘烤后的石斛与有机溶剂混合后磨碎，得到石斛浆液；所述的有机溶剂包括甲醇、乙醚或丙酮；

3)将所述步骤2)得到的石斛浆液进行超声破碎，固液分离后，得到上清液；

4)将所述步骤3)得到的上清液进行浓缩，得到提取物干粉；

5)将所述步骤4)得到的提取物干粉与硫酸溶液混合，得到混合液，调节所述混合液的pH值至9.5～10.5，将得到的碱性混合液静置；

6)将所述步骤5)静置后的碱性混合液与二氯甲烷混合，离心，得到二氯甲烷相；

7)将所述步骤6)得到的二氯甲烷相浓缩，得到生物碱干粉；

8)将所述生物碱干粉用甲醇复溶，固液分离后得到游离生物碱待测样品；

9)用超高效液相色谱分离所述游离生物碱待测样品，将分离后的生物碱成分用质谱检测，得到生物碱成分物质峰；

10)用OSI/SMMS软件对所述生物碱成分物质峰进行定性分析。

优选的，所述步骤1)中杀青的温度为100～110℃；杀青的时间为15～25min。

优选的，所述步骤1)中烘烤的温度为50～65℃；所述烘烤至恒重。

优选的，所述步骤2)中石斛的质量与有机溶剂的体积比为(50～80)mg：(1～2)mL。

优选的，所述步骤3)中超声的温度为25～30℃；超声的时间20～40min；所述超声的功率为100～150W。

优选的，所述步骤3)和步骤8)中所述固液分离采用离心的方法；

所述离心的转速为8000～12000rpm；

所述离心的时间为10～15min。

优选的，所述步骤4)和步骤7)中浓缩独立为氮气吹干浓缩；

所述浓缩的时间为40～100min。

优选的，所述步骤5)中提取物干粉的质量与硫酸溶液的体积比为(7～11)mg：(1～2)mL；