[发明专利]一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法

说明书

本发明公开了一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，包括以下步骤：（1）根据检测需要，制备多种维生素标准溶液，包括以下维生素中的至少两种以上：维生素A醋酸酯、维生素D₃、维生素E乙酸酯；采用HPLC‑MS/MS检测标准溶液，得到标准曲线方程；（2）称取样品，到棕色容量瓶中，加入提取溶液超声提取10‑30min，冷却定容，离心，用0.22μm有机相滤膜，过滤上机，采用与步骤1相同的色谱参数和质谱检测参数进行分析测试；（3）根据步骤1和步骤2的检测结果计算得出样品中的多种维生素的含量。本发明的同时检测配合饲料中的多种脂溶性维生素的方法，在一次检测分析过程中完成多种不同的维生素的检测分析。

技术领域

本发明涉及一种色谱检测分析方法，特别涉及一种检测维生素的色谱检测方法，对于脂溶性维生素具有良好的检测分析效率，属于化学成分分析技术领域。

背景技术

脂溶性维生素包括VA、VD、VE、VK，由于其化学结构多含疏水性的烃链，不溶于水，易溶于有机溶剂。由于溶解性的差异，其检测方法与水溶性维生素也有所不同，特别是样品前处理所用的试剂类型，应当与有机溶剂为主。

目前关于水溶性维生素的检测方法相对完整，如滴定法、比色法、分光光度法以及上文中提到的高效液相色谱法和反相高效液相色谱法等。而对于脂溶性维生素来说，尽管存在检测单一成分的方法，但同时检测的方法相对较少。

王海凤等2006年建立了高效液相色谱法同时检测注射用复方维生素中维生素A棕榈酸酯、维生素D₂、维生素E、维生素K1的含量，各维生素的平均回收率分别为99.7％，98.4％，100.8％和98.5％，方法操作简便，结果准确。

刘红河等2005年建立反相高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时测定食品中维生素A、维生素D和维生素E(α-生育酚)的含量。该方法将食品样品加入乙醇、氢氧化钾及焦性没食子酸，80℃水浴皂化30min，石油醚提取后，氮气吹扫浓缩致干后用流动相溶解，用Supelco C18柱(15cm×4.6mm，5um)色谱柱，以甲醇为流动相，在325nm(VA)、265nm(VD)、294nm(VE)检测波长下进行检测。

谭青松等2007年采用一次进样同时检测鱼体组织中的维生素A、维生素D3和维生素E的方法。以石油醚提取鱼体组织中的脂溶性维生素，用VARIAN Res Elut 5μCl8 90A色谱柱，流动相为甲醇-水，此条件下对提取物中的3种脂溶性维生素能够进行良好的分离。结果表明，在292nm波长下，维生素A、维生素D3和维生素E线性关系良好。以石油醚提取鱼体组织中的脂溶性维生素，采用反相高效液相色谱仪在波长292nm处可同时对鱼体组织中维生素A、维生素D3和维生素E进行较好的分离和测定。

宋金春等2007年建立以高效液相色谱法同时测定注射用12种复合维生素中维生素D2、维生素A与维生素E含量的方法。方法以色谱柱为Inertsil(ODS-2)C18，流动相为乙腈-甲醇-二氯甲烷(80:10:10)，结果表明：维生素D2、维生素E醋酸酯与维生素A棕榈酸酯检测浓度的线性范围分别为0.61～1.43μg/mL、222.6-519.4μg/mL和1.21-2.82mg/mL；平均回收率分别为99.79％、99.53％、101.63％。

卢燕等2012年采用双三元高效液相色谱多阀多柱技术，对同一样品中水溶性维生素和脂溶性维生素不同方法处理得到的样品进行双进样，可同时分析样品中21种维生素。各维生素的方法检出限可达0.002～0.223μg.mL-1范围，本方法可用于多种样品的维生素检测和分析工作。