[发明专利]一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法

权利要求书

1.一种检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，包括以下步骤：

（1）制备多种维生素标准溶液，包括以下维生素中的至少两种以上：维生素A醋酸酯、维生素D₃、维生素E乙酸酯；

采用HPLC-MS/MS检测标准溶液，得到标准曲线方程；

色谱条件如下：

色谱柱：C18柱；所述C18柱是：ADME pH 2-10 3μm 2.1 mm I.D.×150mm柱；

流动相包括流动相A：甲醇水溶液相，和流动相B：甲酸水溶液相；

其中流动相A：甲醇水溶液中甲醇的体积比例大于95%，流动相B：甲酸水溶液中甲酸的含量低于1wt%；

采用梯度洗脱，梯度条件：0~2min，流动相A 50~100%；2~9min，流动相A 100%；9~9.5min，流动相A 100~50%；

质谱条件为，ESI正离子扫描模式：多反应监测参数：干燥气温度325℃，干燥气流速11L/min，雾化气压力45psi，鞘气温度300℃，流速9L/min，毛细管电压4000V，喷嘴电压500V；

（2）称取样品，到棕色容量瓶中，加入提取溶液超声提取10-30min，冷却定容，离心，用0.22μm有机相滤膜，过滤上机，采用与步骤（1）相同的色谱参数和质谱检测参数进行分析测试；

所述提取溶液是，由提取溶液第一组分和提取溶液第二组分按照25-35：65-75体积比例混合配制而成的溶液；

所述提取溶液第一组分是0.03-0.07% 氨水溶液；

所述提取溶液第二组分是0.1-0.3% BHT甲醇溶液；

（3）根据步骤（ 1） 和步骤（ 2） 的检测结果计算得出样品中的多种维生素的含量。

2.如权利要求1所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，标准溶液制备：先用甲醇溶解维生素，配制成质量浓度为1g/L的标准物质储备溶液，然后稀释成分标准工作溶液。

3.如权利要求2所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，标准储备溶液中加入0.2wt%BHT。

4.如权利要求2所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，稀释过程中应用的是提取溶液进行稀释。

5.如权利要求1所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，所述提取溶液第一组份是：0.05%氨水溶液；所述提取溶液第二组分是：0.2% BHT甲醇。

6.如权利要求5所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，提取溶液第一组份和提取溶液第二组分的体积比为30：70。

7.如权利要求1所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，采用梯度洗脱过程中，流动相是：流动相A：含0.01-0.03%氨水的96-99%甲醇水溶液，流动相B ：0.01-0.03%甲酸水溶液。

8.如权利要求7所述检测饲料中多种脂溶性维生素的方法，其特征在于，梯度洗脱程序为：流动相A：含0.02%氨水的98%甲醇水溶液，流动相B ：0.02%甲酸水溶液，流速为0.3mL/min。