[发明专利]高效表达米黑根毛霉脂肪酶的方法有效
| 申请号： | 201611217262.9 | 申请日： | 2016-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN108239648B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 宣姚吉;徐正军;牛其文 | 申请（专利权）人： | 丰益（上海）生物技术研发中心有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/20;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 韦东 |
| 地址： | 200137 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 表达 根毛 脂肪酶 方法 | ||
1.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的多核苷酸序列选自：
(1)编码下式I所示的多肽序列的多核苷酸序列：
A-L1-B-L2-RML (式I)
式中，
A为米黑根毛霉脂肪酶前导肽；
L1为蛋白酶kex2和ste13的酶切位点；
B为米黑根毛霉脂肪酶前导肽；
L2为蛋白酶kex2和ste13的酶切位点；和
RML表示米黑根毛霉脂肪酶的成熟肽序列，其编码序列如SEQ ID NO:1第229～1035位核苷酸序列所示；和
(2)(1)所述序列的互补序列。
2.如权利要求1所述的多核苷酸分子，其特征在于，所述L1和L2的氨基酸序列各自独立如SEQ ID NO:4第71～78位所示。
3.如权利要求1所述的多核苷酸分子，其特征在于，式I所示的多肽序列如SEQ ID NO:4所示。
4.如权利要求1所述的多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸序列选自：
(i)SEQ ID NO:3所示的多核苷酸序列；和
(ii)(i)所述多核苷酸序列的互补序列。
5.一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物含有权利要求1-4中任一项所述的多核苷酸分子的多核苷酸序列。
6.如权利要求5所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物是克隆载体或表达载体。
7.如权利要求6所述的核酸构建物，其特征在于，所述表达载体为适用于毕赤酵母中表达的载体。
8.如权利要求7所述的核酸构建物，其特征在于，所述载体选自pPIC、pPICZ、pAO、pGAP和pGAPZ。
9.如权利要求7所述的核酸构建物，其特征在于，所述表达载体以pAO815质粒为骨架。
10.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求1-4中任一项所述的多核苷酸分子的多核苷酸序列或权利要求5-9中任一项所述的核酸构建物。
11.如权利要求10所述的宿主细胞，其特征在于，所述细胞为酵母细胞。
12.如权利要求11所述的宿主细胞，其特征在于，所述酵母为毕赤酵母细胞。
13.一种制备米黑根毛霉脂肪酶的方法，其特征在于，所述方法包括构建含权利要求1-4中任一项所述的多核苷酸分子的多核苷酸序列的表达载体，将其转入宿主细胞中，以及培养所述宿主细胞以表达所述脂肪酶的步骤。
14.一种米黑根毛霉脂肪酶制备方法，所述方法包括发酵权利要求10-12中任一项所述宿主细胞的步骤。
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