[发明专利]呕吐毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对呕吐毒素进行检测的方法

说明书

本发明涉及生物检测领域，公开了呕吐毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对呕吐毒素进行检测的方法，具体的，公开了用于呕吐毒素检测的胶体金速测卡，该胶体金速测卡包括依次排列在底板上的加样区、结合物区、观测区和吸水区；还公开了对呕吐毒素进行检测的方法，所述方法包括：对待测样品进行前处理，得到呕吐毒素提取物，并使用所述胶体金速测卡对所述呕吐毒素提取物进行检测以及结果分析。同时公开了一种检测呕吐毒素用试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括所述胶体金速测卡、装有纯净水的小瓶。本发明的胶体金速测卡，能够快速有效的提高检测的灵敏度、特异性和精准度。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体地，涉及一种用于呕吐毒素检测的胶体金速测卡、一种对呕吐毒素进行检测的方法以及一种检测呕吐毒素用试剂盒。

背景技术

真菌毒素是真菌在食品或饲料里生长所产生的代谢产物，对人类和动物都有害。真菌毒素造成中毒的最早记载是11世纪欧洲的麦角中毒，这种中毒的临床症状曾在中世纪的圣像画中描述过。

常见的真菌毒素为黄曲霉毒素(B1)、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、T-2毒素、赭曲霉毒素A。

呕吐毒素(DON)，学名为脱氧雪腐镰刀菌烯醇，是由某些镰刀菌产生的一种单端孢霉烯族毒素，低剂量时主要引起食欲下降、体重减轻和代谢紊乱等症状，大剂量时则会导致呕吐。DON毒素是目前已经发现的200余种单端孢烯族毒素中毒性最弱的一种，但它对谷物的污染率以及污染水平却居于镰刀菌毒素的首位，尤其是南方高温高湿地区、长江中下游地区。DON毒素通过污染小麦、大麦、玉米等原料进入食品和饲料，家畜和家禽食用污染的饲料会使DON毒素进入肉、蛋、奶中，从而间接影响人类健康。

目前，呕吐毒素的检测普遍采用液相色谱法，如行标SN/T 1571-2005。该方法为检测机构实验室常规检测方法，由于该方法需大型仪器、专业人员操作、前处理步骤复杂等特点，所以其并不适用于大量样品的现场快速检测。

目前，我国部分高校或企业已对该类呕吐毒素技术产品做了很好的研究，如江南大学(专利号CN 101158685A)、北京勤邦生物技术有限公司(专利号CN 104345145A)和南昌博恒生物制品有限公司(专利号CN101482566B)，这些专利对呕吐毒素免疫技术产品的半抗原制备、抗体制备步骤、产品组装要求和检测步骤做了研究。但市场上呕吐毒素仍然存在检测结果不稳定、假阳性率/假阴性率较高等问题。另外，现有技术的方法的灵敏度以及特异性也较低。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中对呕吐毒素检测时间长、灵敏度、特异性和精准度低且成本高和稳定性差的缺陷，提供一种能快速的、高灵敏度、高特异性、高精准度和稳定性的检测呕吐毒素的胶体金速测卡和试剂盒以及一种对呕吐毒素进行检测的方法。

为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种用于呕吐毒素检测的胶体金速测卡，该胶体金速测卡包括依次排列在底板上的加样区、结合物区、观测区和吸水区；

其中，所述结合物区包括经浸泡、在湿度大于80％的条件下放置至少30min、喷涂金标抗体并干燥得到的抗体金标垫，所述金标抗体为抗呕吐毒素的单克隆抗体和胶体金颗粒的偶联结合物；

所述加样区包括在含有BSA、蔗糖和/或海藻糖、吐温、胆酸、聚乙烯吡咯烷酮、RHODASURF ON-870、STANDAPOLES-1、丝盘60和Triton X-100的pH值为7-9的样品垫浸泡液中浸渍至少30min后并干燥的样品垫；

所述观测区包括在湿度大于80％的条件下放置至少30min后固定检测线和质控线并干燥的层析膜，所述层析膜上固定有检测线和质控线，其中，所述检测线包被有待检测的呕吐毒素与BSA的偶联物，所述质控线包被有与抗呕吐毒素的单克隆抗体特异性结合的二抗。