[发明专利]呕吐毒素检测胶体金速测卡和试剂盒以及对呕吐毒素进行检测的方法

权利要求书

1.一种用于呕吐毒素检测的胶体金速测卡，该胶体金速测卡包括依次排列在底板上的加样区、结合物区、观测区和吸水区；

其中，所述结合物区包括经浸泡、在湿度大于80%的条件下放置至少30min、喷涂金标抗体并干燥得到的抗体金标垫，所述金标抗体为抗呕吐毒素的单克隆抗体和胶体金颗粒的偶联结合物；

所述胶体金颗粒的制备方法包括：

（i）在搅拌的条件下，向沸腾的氯金酸溶液中加入柠檬酸钠，使氯金酸与柠檬酸钠接触反应，当溶液变为酒红色时，继续加热5-10min，得到反应产物；

（ii）将步骤（i）得到的反应产物在15-20℃/min降温速度下降温至15-35℃，得到粒径为15-30nm的胶体金颗粒；

其中，柠檬酸钠的加入量使得氯金酸与柠檬酸钠的重量比为1：3.5-4，所述氯金酸溶液为氯金酸的水溶液，并且在所述氯金酸溶液中，所述氯金酸的含量为1-1.3重量%；

所述抗体金标垫的制备方法包括：

（1）将抗待测呕吐毒素的单克隆抗体加入至pH7.5-9的胶体金溶液中，接触40-80min，得到标记有所述单克隆抗体的胶体金溶液；

（2）向步骤（1）得到的标记有所述单克隆抗体的胶体金溶液中加入BSA溶液，接触40-80min；

（3）将步骤（2）得到的混合物料进行固液分离，将沉淀物复溶于含有蔗糖和/或海藻糖、BSA和叠氮钠的硼酸溶液中，得到金标抗体溶液；

（4）将步骤（3）所制备的金标抗体溶液喷涂于在含有吐温、BSA、蔗糖和/或海藻糖以及聚乙二醇的金标垫浸泡液中浸泡后且经干燥至含水量60-80重量%的金标垫上，之后干燥至含水量小于10重量%；

其中，在喷涂所述金标抗体溶液前，将干燥的金标垫于相对湿度80-90%且2-6℃的条件下放置30-60min；

所述金标垫浸泡液为0.01重量%的PBS溶液，其中，吐温的含量为0.1-1体积%，BSA的含量为3-7重量%，蔗糖和/或海藻糖的含量为3-8重量%，聚乙二醇的含量为0.03-1重量%，pH为8.5-9；

所述加样区包括在含有BSA、蔗糖和/或海藻糖、吐温、胆酸、聚乙烯吡咯烷酮、RHODASURF ON-870、STANDAPOLES-1、丝盘60和Triton X-100的pH值为7-9的样品垫浸泡液中浸渍至少30min后并干燥的样品垫；

所述样品垫浸泡液为0.01重量%的PBS溶液，其中，吐温的含量为0.005-0.05体积%，BSA的含量为3-7重量%，蔗糖和/或海藻糖的含量为4-8重量%，胆酸的含量为0.1-1重量%，聚乙烯吡咯烷酮的含量为0.008-0.015重量%，RHODASURF ON-870的含量为0.01-0.1重量%，STANDAPOLES-1的含量为0.01-0.1重量%；丝盘60的含量为0.01-1体积%；Triton X-100的含量为0.05-0.1体积%，pH为8.5-9.5；

所述观测区包括在湿度大于80%的条件下放置至少30min后固定检测线和质控线并干燥的层析膜，所述层析膜上固定有检测线和质控线，其中，所述检测线包被有待检测的呕吐毒素与BSA的偶联物，所述质控线包被有与抗呕吐毒素的单克隆抗体特异性结合的二抗。

2.根据权利要求1所述的胶体金速测卡，其中，所述样品垫浸泡液中RHODASURF ON-870、STANDAPOLES-1、丝盘60和Triton X-100的总含量为0.03-3体积%。

3.根据权利要求1所述的胶体金速测卡，其中，干燥样品垫的时间至少为1小时，且样品垫在干燥后其四边经裁去至少1cm宽度的处理。

4.根据权利要求1所述的胶体金速测卡，其中，所述层析膜通过以下步骤进行制备：将所述层析膜在湿度大于80%的条件下放置至少30min，之后在所述层析膜上对所述呕吐毒素与BSA的偶联物和所述二抗进行固定，然后干燥并组装；干燥前所述层析膜含水量为50-80重量%；干燥后所述层析膜含水量为小于10重量%。

5.根据权利要求1或4所述的胶体金速测卡，其中，所述检测线距离结合物区为0.5-1mm，所述质控线距离检测线为0.5-1mm。