[发明专利]制备囊泡的方法和由其产生的制剂

说明书

本公开内容提供了制备囊泡的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供形成囊泡之脂质的熔融混合物，以及随后将所述熔融混合物加入包含抗原的水性溶液中，从而形成含有抗原的囊泡。在另一些实施方案中，所述方法包括提供冻干的脂质制品，以及用包含抗原的水性溶液使所述冻干的脂质制品再水合，从而形成含有抗原的囊泡。所述冻干的脂质制品通过使形成囊泡之脂质熔化以产生熔融脂质混合物以及随后将该熔融脂质混合物冻干而制备。本公开内容还提供了利用这些方法制备的含有抗原的囊泡制剂。本公开内容还提供了试剂盒，其包含第一容器中的冻干的脂质制品和第二容器中的包含抗原的水性溶液。

本申请是申请号为201080039405.6、发明名称为“制备囊泡的方法和由其产生的制剂”的中国专利申请的分案申请，原申请是2010年07月06日提交的PCT国际申请PCT/US2010/041078于2012年03月05日进入中国国家阶段的申请。

相关申请的交叉引用

依据35U.S.C.§119(e)，本申请要求享有2009年7月6日提交的美国临时专利申请系列号61/223,196和2009年10月30日提交的美国临时专利申请系列号61/256,912的优先权，其每篇均通过引用整体并入本文。

背景技术

囊泡，作为细胞膜的模型，首次描述于二十世纪六十年代(参见Bangham等人，J.Mol.Biol.13：238-252，1965)。已发现囊泡在递送小分子药物、疫苗辅佐(vaccineadjuvancy)、基因转移和诊断成像方面具有诸多应用(例如参见Liposome Technology，第3版，Gregory Gregoriadis编，Informa HealthCare，2006以及Liposomes：A PracticalApproach(The Practical Approach Series，264)，第2版，Vladimir Torchilin和VolkmarWeissig编，Oxford University Press，USA，2003)。

已描述了制备囊泡的多种方法(例如参见上文引用的参考文献以及Walde和Ichikawa，Biomol.Eng.，18：143-177，2001)。但是，本领域中仍需要可用于将物质包封在囊泡内的方法。

本领域已描述的一种方法是所谓的“3步熔化法”。首先将形成囊泡的脂质在高温(例如120℃)下熔化。第二步中，通过将水性缓冲液(例如碳酸氢盐缓冲液)加入熔融脂质中以产生乳剂。最后，在降低的温度(例如50℃)下使待包封的物质与乳剂组分均质化，继而冻干。或者，将由乳剂得到的囊泡冻干，随后在待包封物质存在下使其重溶。

尽管例如上述的方法可非常适于包封可经受高温的物质和/或能够快速扩散到空囊泡中的小分子，但我们已发现其不适于包封疫苗中常常涉及的抗原类型(例如多肽、病毒等)。特别地，我们已发现这些方法产生低包封效率，并且可显著降低相关抗原的活性(例如通过免疫应答所测定地)。因此，本领域中需要能够包封抗原同时对抗原活性的影响尽可能小的制备囊泡的方法。

发明概要

在一个方面中，本公开内容提供了制备囊泡的方法，其包括提供形成囊泡之脂质的熔融混合物以及随后将所述熔融混合物加入包含抗原的水性溶液中以形成含有抗原的囊泡的步骤。

在另一方面中，本公开内容提供了制备囊泡的方法，其包括提供冻干的脂质制品以及用包含抗原的水性溶液使所述冻干的脂质制品再水合以形成含有抗原的囊泡的步骤。所述冻干的脂质制品通过使形成囊泡的脂质熔化以产生熔融脂质混合物以及随后将所述熔融脂质混合物冻干而制备。

在另一方面中，本公开内容提供了利用这些方法制备的含有抗原的囊泡制剂。在一些实施方案中，所述含有抗原的囊泡制剂相比于利用现有技术方法可获得的那些显示出更高的抗原包封水平。在一些实施方案中，所述含有抗原的囊泡制剂相比于利用现有技术方法可获得的那些显示出更高的抗原活性水平。