[发明专利]一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种检测阿苯达唑及其代谢物的检测方法，属于药物检测技术领域。所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法是利用2，6‑二叔丁基对甲酚和NaOH提取样品中的阿苯达唑及其代谢物，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述2，6‑二叔丁基对甲酚的浓度为1％；所述NaOH溶液的浓度为50％。本发明的有益效果是：本方法不仅仅适用于动物肌肉，还适用于肝脏等复杂基质的检测，本发明所使用的试剂毒性小，成本低，节约时间，还能有效地减少对杂质的提取，简化净化步骤；采用高效液相色谱‑串联质谱法进行检测，相比于单一的高效液相色谱，具有灵敏度高，重复性好，检测限低的优势。

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法及应用。

背景技术

目前，检测阿苯达唑的方法中使用乙醚、乙腈等毒性大的溶剂，或者直接使用乙腈提取，这些方法不仅使样品提取不充分，而且目标化合物在提取过程中极易遭到破坏，从而影响定量结果。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明采取的技术方案是：

一种阿苯达唑及其代谢物的检测方法，利用2，6-二叔丁基对甲酚和NaOH提取样品中的阿苯达唑及其代谢物，之后使用高效液相色谱质谱联用仪检测；所述2，6-二叔丁基对甲酚的浓度为1％；所述NaOH溶液的浓度为50％。

在上述方案的基础上，所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法步骤如下：

1)提取纯化

称取样品5.00g，加入5mL水、150μL 50％NaOH溶液和1mL 1％2，6-二叔丁基对甲酚，涡旋混合，再加入20mL乙酸乙酯，振荡1min超声提取20min，4000r/min离心5min，取上清液，向残渣中加入10mL乙酸乙酯重复提取一次，合并两次上清液于梨形瓶中，40℃旋蒸至干；向旋干后的梨形瓶中加入6mL乙腈饱和正己烷，振荡混匀，倒入离心管中，再向梨形瓶中加入2mL乙腈，涡旋超声1min后一并倒入离心管中，向离心管中加入6mL 0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋2min，4000r/min离心5min，除去正己烷层，备用；若乳化，超声并用吸管搅拌后离心；

2)净化柱净化

用5mL甲醇和5mL水平衡活化PCX固相萃取柱后，取提取液过PCX净化柱，分别用3mL水和3mL甲醇淋洗，然后用15mL体积浓度为5％氨水甲醇溶液洗脱，接收的洗脱液于40℃旋蒸至干后；分别加入1mL甲醇和1mL水，涡旋，过0.22μm尼龙滤膜，待测；

3)高效液相色谱质谱联用仪检测

质谱参数：离子源AJS ESI源；Gas Temp：325℃；Gas Flow：10L/min；Sheath GasTemp350℃；Sheath Gas flow：11L/min；

液相参数：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇。

在上述方案的基础上，所述阿苯达唑及其代谢物的检测方法应用于检测动物源性食品中的阿苯达唑及其代谢物。

在上述方案的基础上，所述动物源性食品为肌肉、蛋类、乳类、肝脏和肾脏。

本发明的有益效果：

本发明方法中用2，6-二叔丁基对甲酚和NaOH提取阿苯达唑及其代谢物，毒性较小；此外，阿苯达唑及其代谢物在水溶液中呈碱性，加入质量浓度为50％NaOH水溶液可使阿苯达唑及其代谢物成分子状态，利于有机试剂提取；加入质量浓度为1％2，6-二叔丁基对甲酚可以保护阿苯达唑不被氧化；乙酸乙酯为弱极性的有机试剂，其加入有利于阿苯达唑的提取且杂质提取的少；乙腈饱和正己烷用来去除样品中的油脂类杂质，加入盐酸可使阿苯达唑成离子状态有利于PCX净化柱净化；5％氨水甲醇呈强碱性，洗脱时可将PCX净化柱吸附的阿苯达唑置换下来。