[发明专利]一种针对腺病毒的多途径协同免疫方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫技术领域，进一步涉及卵黄抗体免疫效果的协同增效技术，具体涉及一种针对腺病毒的多途径协同免疫方法。

背景技术

鸡心包积液和肝炎综合征是由禽腺病毒I群中的一些血清型引起鸡的一种急性传染病，但各血清型的致病力不同。该病多发于3～6周龄的肉鸡，也可偶发于20周龄内的后备蛋鸡或种鸡，无性别差异，在更大龄的肉鸡也很少发生。各种品系肉鸡对本病都易感，其他禽类如火鸡、鹅、雉鸡等也有发病的报道。临床上以突发性死亡率增加，心包积液和肝炎综合征为主要特征。本病的感染途径主要是呼吸道、消化道及眼结膜等，可经机械方式和被带毒粪便污染的器具而在鸡群间、鸡场间迅速传播。国内曾经在非SPF鸡胚传代的疫苗生产用毒种中检测到禽腺病毒的污染，如果污染的疫苗曾经推广使用，可能会引起此病的广泛传播。越来越多的研究表明，心包积液和肝炎综合征的发生与某些免疫抑制病有关，常与引起禽类呼吸道疾病的病原微生物混合感染，随着家禽养殖规模的逐渐扩大，该病的危害也更加严重，对该病的防控现已成为国际禽病研究的热点。由于腺病毒的多血清型，该病至今没有有效疫苗可供使用。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种针对腺病毒的多途径协同免疫方法，以解决现有技术中针对腺病毒的人工免疫方法效果不佳的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是现有技术注射卵黄抗体免疫腺病毒的方法效果不佳。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种针对腺病毒的多途径协同免疫方法，包括以下步骤：

1)制备腺病毒液；

2)制备腺病毒卵黄抗体；

3)将所述腺病毒液与腺病毒卵黄抗体混合后对鸡进行免疫注射。

作为优选，所述腺病毒液中的抗原成为为腺病毒I群血清4型。

作为优选，步骤3)所述腺病毒液中病毒效价为10^8.5TCID₅₀、10^8.0TCID₅₀或10^7.5TCID₅₀。

作为优选，步骤3)所述腺病毒卵黄抗体中抗体效价为1:4、1:8或1:16。

作为优选，步骤3)中腺病毒液与腺病毒卵黄抗体的混合体积比是1:1。

作为优选，步骤3)中所述注射的剂量是0.5mL。

作为优选，步骤3)中腺病毒液与腺病毒卵黄抗体混合后先加入油佐剂乳化，油水混合制剂型，而后再对鸡进行免疫注射。

作为优选，步骤1)所述腺病毒液是通过以下方法制备的：取分离鉴定株腺病毒I群血清4型，用灭菌生理盐水10倍稀释病毒液，接种已长满单层的鸡胚成纤维细胞，待细胞病变达到80％时，收获，反复冻融三次，测得的病毒含量为10^8.0TCID₅₀，将检验合格的冻融液浓缩4倍后，为免疫原。

作为优选，步骤2)所述腺病毒卵黄抗体是通过以下方法制备的：

A)制备腺病毒灭活疫苗；

B)取120日龄蛋鸡，每只胸部肌肉注射步骤A)所述疫苗2ml，10日后每只胸部肌肉再注射步骤A)所述疫苗2ml，10日后每只胸部肌肉再注射步骤A)所述疫苗2ml；

C)取步骤B)三免后的鸡卵，制备卵黄抗体。

作为优选，步骤C)所述制备卵黄抗体，具体包括以下操作：将分离的蛋黄搅拌成均匀膏状，加入等体积注射用水，搅拌均匀后，65℃加热灭活30分钟；加入6倍量酸化水，重复3组；将各组降温至1～4℃；4℃静置2～5小时，14000转离心取上清；加入正辛酸终浓度为0.3％，室温放置5～12小时；卵黄液用孔径为0.45μm滤器过滤澄清，再用0.22μm滤器过滤除菌；经截留分子量为100KD超滤膜堆进行浓缩；加入终浓度为0.2％甲醛溶液，室温放置24小时，期间振摇4～6次。

作为优选，所述鸡是SPF鸡。