[发明专利]一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法

说明书

本发明涉及一种分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，属于分析化学技术领域，本发明采用唾液收集管收集唾液样品，采集完后经高速离心后取上清液，然后依次经酸化、加入内标，后涡旋振荡至混匀，接着过微孔滤膜，滤液采用超高效液相色谱‑多波长荧光法分离和测定唾液中多种酚类物质，制作标准曲线，内标法定量。本发明方法可以有效的用于分离和测定唾液中多种酚类物质，方法分离效果好，检出限低，精密度好，准确可靠，具有推广应用价值。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法。

背景技术

苯酚、苯二酚、甲基苯酚等，它们不但有较难闻的气味，还对皮肤及呼吸道黏膜有强烈的刺激作用和致癌作用。另一些酚类，如丁香酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚，有强烈的香气，是香精中的重要配方之一。这些酚类物质大量存在于卷烟主流烟气中，可通过烟草吸食者、被动吸烟者的唾液溶解吸收，进而对人体产生影响。此外，大量暴露于酚类物质的人体唾液中可能存在酚类，大量吸入酚类物质而引发的酚类物质中毒者唾液中也可能存在酚类物质。因此研究测定人体唾液中吸收溶解的酚类成分，不仅可为吸烟与健康的评估提供数据支持，还可用于评价酚类物质的人体暴露量，或者用于检测酚类中毒。

目前，测定不同基质、样品中酚类物质已有大量报道，然而唾液样品中多种酚类物质的测定还未见报道。酚类物质常用的测定方法有气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱法。但采用气相色谱-质谱联用法测定酚类物质易氧化或受热分解，通常需要进行衍生化处理，操作十分繁琐，影响测定结果的准确性。采用常规的高效液相色谱法测定时，同时测定的目标物少，分离时间长，且前处理过程繁琐。因此，开发简单快速、分离效果好、高通量、高灵敏度、定量准确的唾液中多种酚类物质的分离和测定方法非常迫切。

发明内容

本发明的目的在于针对目前唾液中多种酚类物质分离和测定的方法未见文献报道的现状，以及现有技术的不足，提供一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，该方法分离效果好，检出限低，精密度好，准确可靠，具有推广应用价值，基于实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，包括以下步骤：

步骤(1)，样品采集：将唾液收集管中的棉棒放于口中，咀嚼后放回收集管，经离心后，得到唾液样品；所述的咀嚼时间为1-3min；

步骤(2)，样品酸化：移取唾液样品于样品管中，依次加入酸化剂、内标物，然后经涡旋振荡至混合均匀，得到酸化液；

所述的酸化剂为乙酸，所述的酸化剂用量为唾液体积的0.5％-2％；

所述的内标物为4-氟苯酚，浓度为0.1-10mg/L；

步骤(3)，测定：将步骤(2)得到的酸化液，过0.22μm微孔滤膜，采用超高效液相色谱-多波长荧光法分离和测定唾液中的多种酚类物质，内标法定量，根据标准曲线计算各酚类物质的含量；

所述的多种酚类物质包括对苯二酚、间苯二酚、邻甲基对苯二酚、邻苯二酚、苯酚、4-甲基苯酚、2-甲基苯酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚、2,6-二甲基苯酚、2-乙基苯酚和丁香酚；

所述超高效色谱条件如下：

色谱柱：C18反相色谱柱或等效柱，C18反相色谱柱的规格为长度×内径是100mm×2.1mm，粒径为1.7μm；流速为0.1-0.4mL/min；柱温为30-60℃；进样量为1-3μL；流动相A为体积浓度为0.5-2％的乙酸水溶液，流动相B为乙酸、乙腈和水的混合溶液，流动相B乙酸浓度与流动相A中乙酸浓度相同，乙腈体积浓度为25-50％，梯度洗脱；

梯度洗脱条件为：第0min，流动相A 70-95％，流动相B 30-5％；第6-12min任意一时刻改变流动相浓度配比，改变后的流动相A为0％，流动相B为100％；第15min停止洗脱；具体见下表1：