[发明专利]一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法

权利要求书

1.一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1），样品采集：将唾液收集管中的棉棒放于口中，咀嚼后放回收集管，经离心后，得到唾液样品；所述的咀嚼时间为1-3 min；

步骤（2），样品酸化：移取唾液样品于样品管中，依次加入酸化剂、内标物，然后经涡旋振荡至混合均匀，得到酸化液；

所述的酸化剂为乙酸，所述的酸化剂用量为唾液体积的0.5%-2%；

所述的内标物为4-氟苯酚，浓度为0.1-10mg/L；

步骤（3），测定：将步骤（2）得到的酸化液，过0.22 μm微孔滤膜，采用超高效液相色谱-多波长荧光法分离和测定唾液中的多种酚类物质，内标法定量，根据标准曲线计算各酚类物质的含量；

所述的多种酚类物质包括对苯二酚、间苯二酚、邻甲基对苯二酚、邻苯二酚、苯酚、4-甲基苯酚、2-甲基苯酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚、2,6-二甲基苯酚、2-乙基苯酚和丁香酚；

所述超高效色谱条件如下：

色谱柱：C18反相色谱柱，C18反相色谱柱的规格为长度×内径是100 mm× 2.1 mm，粒径为1.7 μm；流速为0.1-0.4 mL/min；柱温为30-60℃；进样量为1-3 μL；流动相A为体积浓度为0.5-2%的乙酸水溶液，流动相B为乙酸、乙腈和水的混合溶液，流动相B乙酸浓度与流动相A中乙酸浓度相同，乙腈体积浓度为25-50%，梯度洗脱；

梯度洗脱条件为：第0min，流动相A 70-95%，流动相B 30-5%；第6-12min任意一时刻改变流动相浓度配比，改变后的流动相A为 0%，流动相B 为100%；第15min停止洗脱；

所述多波长荧光法的荧光检测器的波长选择见下表：

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2.根据权利要求1所述的同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，其特征在于：步骤（1）中唾液离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min。

3.根据权利要求1所述的同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，其特征在于：步骤（2）中唾液移取量为0.5-5 mL。

4.根据权利要求1所述的同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，其特征在于：步骤（2）中涡旋振荡转速为500-20000 rpm，涡旋振荡时间为0.5-10 min。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，其特征在于：步骤（3）中标准曲线绘制方法如下：配制多种酚类物质的5级混合标准溶液，浓度分别为0.05 mg/L、0.5 mg/L、2.5 mg/L、10 mg/L、25 mg/L，5级混合标准溶液中均加入内标物，内标物浓度与唾液样品中加入内标浓度相同，内标物浓度为0.1-10mg/L，对5级混合标准溶液进行超高效液相色谱-多波长荧光法分析，根据各酚类物质响应峰面积与内标物响应峰面积的比值为纵坐标，以各酚类物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各酚类物质的标准曲线。