[发明专利]抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）免疫原制备：

取流感病毒甲1型病毒10~20份、流感病毒甲3型病毒20~30份和流感病毒乙型病毒5~10份，鼻病毒10~20份，冠状病毒10~20份，呼吸道合胞病毒5~10份，腺病毒5~10份，肺炎链球菌10~20份，金黄色葡萄球菌20~30份混合成病毒+细菌液；

将等量体积的病毒+细菌液与等量体积的福氏完全佐剂混合，搅拌乳化，制成油包水福氏完全佐剂流感病毒及肺链菌、葡萄球菌免疫原；

将等量体积的病毒+细菌液与等量体积的福氏不完全佐剂混合，搅拌乳化，制成油包水福氏不完全佐剂流感病毒及肺链菌、葡萄球菌免疫原；

每毫升福氏完全佐剂免疫原和福氏不完全佐剂免疫原中，均含有病毒50～200μg+细菌10亿～50亿；

（2）免疫：

将福氏完全佐剂免疫原皮下和肌肉10～100点注射给产蛋母鸡，每只产蛋母鸡注射1ml～1.5ml免疫原，然后每隔一周使用福氏不完全佐剂免疫原1ml皮下和肌肉20～60点注射给产蛋母鸡共计五次，此后每隔一个月再使用福氏不完全佐剂免疫原1ml皮下和肌肉10～40点注射给产蛋母鸡加强免疫五次；

（3）抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体水提取物的制备：

收集免疫20天后的免疫母鸡的鸡蛋，鸡蛋表面用水洗净、70%酒精浸泡，去蛋壳取蛋黄，去除蛋黄膜取蛋黄液，将蛋黄液与蒸馏水按体积比1:3～11的比例加蒸馏水搅拌，并用1NHCl调节酸碱度至pH4.8～5.5，在温度4℃下静置过夜；

将蛋黄稀释液在4℃高速离心15分钟取上清，然后经截留分子量为10~50kDa的中空纤维超滤器中超滤浓缩10～20倍，再加入0.02%～5.0%的氯已定，并使用1N NaOH调节酸碱度至pH7.0～7.5，且在4℃静置过夜；之后高速离心10分钟取上清，将上清经0.22μm的消毒微孔滤膜过滤除菌，即得抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体水提取物。

2.根据权利要求1所述的抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体制备方法，其特征在于：所述免疫中的产蛋母鸡包括普通环境下饲养、清洁环境下饲养、以及SPF环境下饲养的莱杭鸡、海兰褐鸡、罗曼鸡、明星鸡、以及家养的土鸡。

3.如权利要求1所述的制备方法制取的特异性抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体在制备治疗感冒、鼻炎、鼻窦炎、扁桃体炎、咽喉炎、支气管炎的药物中的应用。

4.一种抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体纯品的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：将如权利要求1所述方法制备的抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体水提取物加硫酸胺至45%~60%的饱和度充分搅拌，室温静置2～12小时，然后高速离心10分钟，取沉淀物，将沉淀物使用蒸馏水稀释到原体积量，再加硫酸胺至28%~35%的饱和度充分搅拌，室温静置2～12小时，然后高速离心10分钟，取沉淀物，用蒸馏水溶解后采用中空纤维超滤膜超滤除盐，即得抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体纯品。