[发明专利]通过质谱分析法检测双氢睾酮的方法

说明书

本申请为分案申请，原申请的申请日是2009年9月30日，申请号是200980148812.8(PCT/US2009/059090)，发明名称为“通过质谱分析法检测双氢睾酮的方法”。

相关专利申请的交叉参考

本申请要求2008年11月17日提交的美国申请号12/272,663的优先权，并且要求2008年10月6日提交的美国临时申请号No.61/103,202的权益，每一篇申请以其全部通过引用并入本文。

技术领域

本申请涉及双氢睾酮(DHT)的检测。在具体方面中，本申请涉及通过质谱分析法检测双氢睾酮(DHT)的方法。

背景技术

提供下列的背景技术描述仅仅作为帮助理解本发明，并不承认其描述或构成本发明的现有技术。

双氢睾酮(DHT)[(17β-羟基-5a-雄烷-3-酮)]是分子量为290.4道尔顿的类固醇激素。DHT是由睾酮外周组织合成的有效雄激素。过量的DHT分泌经由转化为睾酮可以产生痤疮、多毛症和男性化。DHT是前列腺增生的病因(causal agent)，并且血液中的测量可用于评估对睾酮到DHT转化的抑制剂的顺应性和应答。

测量样品中DHT的质谱分析法已被报导。参见，例如Chang，Y.，等人，Analyst 2003，128：363-8；Caruso，D.，等人，Neurochem Int 2008，52：560-8；Wang，C.，等人，Steroids 2008，XXX：XXX-XXX(doi：10.1016ij.steroids.2008.05.004)；Zhao，M.，等人，Steroids 2004，69：721-6；Janzen，N.，等人，J Chroma B 2008，861：117-22；Licea-Perez，H.，等人，Steroids 2008，73：601-10；Kashiwagi，B.，等人，J Andrology 2005，26：586-91；Kashiwagi，B.，等人，Urology 2005，66：218-23；Umera，M.，等人，Cancer Sci 2007，99：81-86；和Mohler，等人，美国专利中请号11/973，127(2007年10月8日提交)。

发明内容

本发明提供通过包括串联质谱分析法在内的质谱分析法检测样品中双氢睾酮(DHT)的量的方法。优选地，本发明的方法不包括在质谱分析法分析之前衍生样品中的DHT。

在一个方面，提供测定体液样品中未衍生的双氢睾酮(DHT)的量的方法。该方面的方法包括：(a)通过固相萃取(solid phase extraction)纯化体液样品中的DHT；(b)离子化来自体液样品的DHT以产生一种或多种通过质谱分析法可检测的DHT离子，其中所产生的离子选自质荷比为291.10±0.50的DHT先驱离子，和选自255.20±0.50和79.20±0.50的一种或多种DHT碎片离子；和(c)通过质谱分析法测定一种或多种DHT离子的量。在测量一种或多种DHT离子的量之后，DHT离子(一种或多种)的量被用于计算测试样品中的未衍生的DHT的量。在一些实施方式中，质谱分析法是串联质谱分析法。在一些实施方式中，固相萃取和质谱分析以联机方式进行。在一些实施方式中，作为高紊度液相色谱(high turbulence liquid chromatography，HTLC)进行固相萃取。在一些实施方式中，方法进一步包括在质谱分析法之前使用高效液相色谱(HPLC)纯化体液样品中的DHT；优选使用联机处理。在一些实施方式中，体液样品是血浆或血清。在一些实施方式中，方法具有在5ng/dL到200ng/dL——包括5ng/dL和200ng/dL——的范围内的定量限制。在一些实施方式中，通过质谱分析法检测的一种或多种DHT离子(一种或多种)的量通过与内标比较被用于计算测试样品中未衍生的DHT的量；内标优选地为16，16，17-d₃双氢睾酮。上面列出的实施方式的特征在本发明的方法中可以没有限制地进行组合使用。