[发明专利]一种检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的酶联免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的酶联免疫试剂盒。本发明所提供的检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的酶联免疫试剂盒，包括包被的抗牛IgG的多克隆和高特异性单克隆抗体和以牛IgG和牛IgG的Fc片段为抗原。本发明使用高特异性抗体所建立的ELISA方法检测实际样品稳定可靠，不易受基质干扰，具有较好的实际应用价值和开发成商品化试剂盒的潜力，将打破牛乳掺伪检测产品国外试剂盒垄断的局面。更重要的是，通过建立具有自主知识产权的检测方法，将为我国乳品掺伪的发生提供有效的预警技术手段，保障消费者合法权益。

技术领域

本发明涉及一种检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的酶联免疫试剂盒。

背景技术

羊乳营养价值高，在国际营养界被誉为“乳中之王”。羊乳的脂肪颗粒较小，更易于人体消化吸收，而且长期饮用羊乳不会引起肥胖。羊乳中的维生素及微量元素含量也明显高于牛乳。羊乳粉是国内外营养专家一致认为最接近人乳的乳品，羊乳粉的蛋白质结构构成与人乳的基本相同，含有大量的乳清蛋白，且不含牛乳中的某些可致过敏的异性蛋白。美国、欧洲的部分国家均把羊乳视为营养佳品，欧洲鲜羊乳的售价是牛乳的7倍。

水牛是我国南方重要的役用家畜，水牛乳也是老少皆宜的营养佳品，以水牛乳加工的乳制品如广东顺德双皮奶等更是供不应求。水牛乳乳汁浓厚，清香无腋气，味道醇厚甜美，不但乳脂肪和乳蛋白含量高，乳质佳，还富含锌、铁等矿物元素，且易于吸收，脂肪球大，香味浓，既可加工成灭菌乳、酸乳供人们食用，也可加工成乳粉、炼乳、乳油等多种制品满足人们的不同需要。

羊乳和水牛乳作为乳制品的补充，越来越受到消费者的推崇，但是随着其市场的扩大，也出现了有关羊乳和水牛乳质量的问题。由于牛乳较羊乳和水牛乳价格便宜，一些不法商贩在羊乳或水牛乳中掺牛乳成份以此来欺骗消费者。虽然羊乳、水牛乳与普通牛乳营养成分不同，但表观理化性质相似，在羊乳和水牛乳中掺入普通牛乳靠感官和一般理化分析难以辨别。目前报道用于羊乳和水牛乳的乳源性掺假的非免疫学方法包括气相色谱、液相色谱、聚丙烯凝胶电泳，毛细管电泳和PCR技术等，但这些方法均操作繁琐，检测时间长。以特征蛋白为分析目标的酶联免疫检测（ELISA）以其简单、快速和高通量等优点成为乳品掺伪研究的热点方法。但是这些方法基本都基于乳品的高丰度蛋白，如酪蛋白和β-乳球蛋白，这些方法可以高灵敏度的检测使用羊乳中的掺伪情况，但是由于牛和水牛亲缘关系较近，所制备的抗体易于和水牛乳蛋白产生交叉反应，因此不能检测掺伪的水牛乳。IgG以其某些特有的抗原表位，成为反映物种属性的标志蛋白，而液态乳中IgG含量高，容易被检出，使得以其作为目标检测物区分羊乳和水牛乳中掺伪牛乳成为可能。试验通过制备特异性识别牛IgG Fc片段的同种型表位的单克隆抗体，建立了水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的双抗夹心ELISA方法。

发明创造内容

本发明的目的是提供一种检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测检测水牛乳和羊乳中掺伪牛乳的酶联免疫试剂盒，包括包括免疫原、包被抗体和单克隆抗体的制备及样本前处理。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括A , B , C , D , E ,F试剂液、G试剂液、H试剂液、I试剂液、J试剂液。

所述A ，B ，C ，D ，E ，F试剂液为牛IgG标准溶液。

所述G试剂液为酶标二抗。

所述H试剂液为四甲基联苯胺。

所述I试剂液为PBS洗涤液。

所述J试剂液为终止液。

可作为固定抗体与载体蛋白的偶联物的载体的物质很多，如聚苯乙烯等。该载体的形式可以是试管、微量反应板凹孔、小珠、小圆片等。