[发明专利]抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂及其制备方法

权利要求书

1.一种抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂，其特征在于：所述制剂包括海鞘多肽CS5931和赋形剂。

2.根据权利要求1所述的抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂，其特征在于：所述赋形剂选自糖类、多元醇类、聚合物类中的一种或几种；所述糖类选自葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、棉子糖、菊糖、纤维素中的一种或几种，多元醇选自甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、肌醇和硫醇中的一种或几种，聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮、牛血清白蛋白、右旋糖苷、聚乙二醇、明胶、β-环糊精、纤维素中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂，其特征在于：所述海鞘多肽CS5931与赋形剂的重量份数1：1～4，优选1：2。

4.一种如权利要求1中所述的抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于：称取海鞘多肽，加入适量注射用水溶解，加入赋形剂使溶解，补加注射用水至全量，用0.22μm滤膜无菌过滤，灌装，将混合后的溶液装入清洁无菌的西林瓶中，用胶塞半扣塞，冷冻干燥，即得。

5.根据权利要求1所述的抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于：冻干过程是：预冻：板层温度为-35℃～-25℃，保温4-5小时；低温升华干燥：真空度0～30Pa，板层温度为-35℃～0℃，保温15-17小时；二次干燥：板层温度20～30℃，保温4-5小时以上。

6.一种如权利要求1中所述的抗肿瘤海鞘多肽CS5931冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于：冻干过程是：预冻：板层温度为-35℃，保温4小时；低温升华干燥：真空度0～30Pa，板层温度为-35℃～0℃，保温16小时；二次干燥：板层温度25℃，保温4小时以上。

7.一种如权利要求1中所述的抗肿瘤海鞘多肽CS5931的制备方法，其特征在于：将克隆编码多肽CS5931的基因在大肠杆菌中表达，并通过DEAE离子交换和Superdex75分子筛凝胶层析制备目的多肽；经变性复性后，制备好不带His标签的有活性的目的多肽；具体步骤如下：

1)海鞘多肽CS5931大肠杆菌表达体系发酵：克隆编码多肽CS5931的基因连接入质粒PET-21a载体上，导入表达菌BL21构成工程菌BL21/pET21a-CS5931，简称pET21a-CS5931，将pET21a-CS5931接种在含有氨苄的培养基上进行活化，活化后的种子液转接入含有氨苄的LB培养基中培养，接种后4-5h时加入IPTG进行诱导，继续发酵培养4.5-8.5h；

所述的IPTG添加的终浓度为0.4mM-0.7mM；所述的活化后的种子液转接入含有氨苄的LB培养基中的接种量在3-6％；所述的pET21a-CS5931活化后接种入LB培养基中发酵的装液量在20-45％；所述IPTG加入后的发酵温度为23℃-30℃；

2)海鞘多肽CS5931的分离纯化：通过DEAE阴离子交换柱层析和Superdex75分子筛凝胶层析制备；使目的多肽得到纯化；

3)所述的变性复性：向纯化好的目的多肽溶液中分次缓慢加入8M尿素，1-3mML-半胱氨酸，0.3-0.6mML-精氨酸，0.3-0.6mMEDTA，反应3-5h；多肽样品变性完成后，将变性样品放于透析袋中，在复性液中透析24-30h，期间换1次复性液；复性完成后，将复性液更换为透析液，透析3-5h，将透析完成的样品浓缩冻干得到纯化后的抗肿瘤海鞘多肽CS5931。