[发明专利]一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法

说明书

本发明公开了一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法，整个过程无需投入过多的基础设施，经济适用，成本低，操作简单，易于掌握，成功率高。包括以下步骤：（1）蒴果采集及保存；（2）消毒；（3）接种；（4）继代培养；（5）春化处理；（6）移栽及病虫害防治；（7）花期控制。采用上述方法一颗成熟的蒴果可获得完整植株2000‑3000株，种子萌发率95%以上，通过该方法可实现黄花杓兰常年开花。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的，涉及一种黄花杓兰组培快繁及花期调控的方法。

背景技术

杓兰属是著名的兰科(Orchidaceae)观赏属之一，该属约50种，主要产东亚、北美、欧洲等温带地区和亚热带地区。中国是世界杓兰分布中心，有32个原生种，主要分布于中国西南的横断山区。杓兰因其唇瓣呈拖鞋状，也有“拖鞋兰”之称，具有很高的观赏和开发价值。黄花杓兰(Cypripedium flavum P.F.Hunt et Summerh.)花色艳丽，花型奇特，近年来由于人类活动的增加、生境片断化、过度采挖及放牧等导致黄花杓兰的野生种群及个体数量急速下降。黄花杓兰的种子细小，种子胚胎本身不带营养，在自然界只能靠共生真菌提供的营养萌发生长，自然条件下很难繁殖。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用黄花杓兰种子进行组培快繁以及进行花期调控的方法，该方法具有操作简单，操作性强，调控效果显著，易于大规模生产推广。为实现上述目的本发明提供的技术方案是：

一种使用成熟黄花杓兰种子进行组培快繁及花期调控的方法，包括如下步骤：

a.黄花杓兰蒴果采集及保存：采集自然授粉或人工授粉结实、成熟的蒴果，在干燥清洁的室内，剔除花蒂清洗表面后用75％酒精擦拭干净，放置于干净滤纸上，将果实剥开抖出种子备用。如需暂时保存，将种子放置于密封的玻璃试管内4℃可保存2周，或放置于-20℃可以保存一年以上。

b.消毒：用1％的次氯酸钠，20℃下消毒。方法为，用力震荡1分钟后置于振荡器上继续进行30分钟震荡消毒处理。将玻璃试管外部用75％酒精檫拭干净后放置于超净工作台上，无菌水洗5次。种子漂白处理过程不仅是对种子的消毒，也同时对种子胚胎外皮进行侵蚀，以除去黄花杓兰种子的萌芽障碍。

c.接种：将消毒漂白处理后的种子植入灭菌的CFM1培养基上。播种完成后将培养瓶放置于20℃的环境里暗培养。

d.继代培养：4-8周后种子开始萌芽并产生圆球茎。3-4个月后圆球茎长成为小苗，此时需要用CFM2培养基进行继代培养。每瓶移植约50个左右的圆球茎。继代培养3-4个月后再用CFM2培养基进行继代培养。每瓶转接10-20棵小苗。继续培养5-6个月，当瓶苗根长8-12cm时便可出瓶。

e.春化处理：将基质清洗干净后放入干净的自封袋内包装。袋内可放入适量低倍抑菌液。将小苗放入4℃冰箱进行低温春化处理。经过至少3个月以上的春化处理后进行栽种。

f.移栽及病虫害防治：栽种基质为4-5份珍珠岩：1份腐殖土：0.5份碎钙化石或白云石粉。移栽后再覆盖一层松针或其它针叶。最佳移栽种植时间为4-5月，栽种4-6周后或更短时间内，开始长叶。喷施叶肥，也可使用缓释肥。寒冷地区推荐使用2-3类型的缓释肥。黄花杓兰需要注意防治鼻涕虫、蜗牛类、卷叶蛾类的虫害。黄花杓兰抗病性强，尖孢镰刀菌类的病害未见发生。栽种3-4年后可达到开花尺寸。

g.花期控制：开花大小的苗在秋天倒苗后放置于4℃冰箱内通过3个月以上的春化处理后可以随时取出栽培，经过2-3个月的栽种可开花，以此可达到黄花杓兰在不同月份开花的效果。

进一步的，步骤b中所述的次氯酸钠为国产分析纯，次氯酸钠溶液需现用现配，也可用10％安替佛民溶液配制。以每1cm³种子20ml 1％的次氯酸钠溶液的比例消毒处理。