[发明专利]美法仑二聚体盐酸盐的制备方法与应用

说明书

本发明涉及美法仑二聚体盐酸盐的制备方法与应用，具体涉及4‑[2‑[[4‑双(2‑氯乙基)氨基]‑L苯丙氨酸乙酯基](2‑氯乙基)氨基]‑L‑苯丙氨酸盐酸盐(即美法仑二聚体盐酸盐)的制备方法与应用。该化合物可作为盐酸美法仑有关物质检测用对照品，用于盐酸美法仑原料或制剂的纯度控制。

技术领域

本发明涉及4-[2-[[4-双(2-氯乙基)氨基]-L苯丙氨酸乙酯基](2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸盐酸盐(即美法仑二聚体盐酸盐)的制备方法与应用，美法仑二聚体盐酸盐是盐酸美法仑原料或制剂工艺中的重要杂质。

背景技术

美法仑(Melphalan)，又叫4-(双(2-氯乙基)-氨基)-L-苯丙氨酸)及其盐酸盐是已知的抗肿瘤药。1964年1月17日，2mg美法仑片剂在美国上市，其活性成分为美法仑；1992年11月18日，盐酸美法仑注射剂ALKERAN在美国上市，活性成分为美法仑盐酸盐。由于苯丙氨酸基团的存在，其易于进入肿瘤细胞内发生作用，从而有效地抑制和阻止恶性肿瘤细胞的增生和成熟。美法仑及其盐酸一盐的应用十分广泛，可用于多发性骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌、慢性淋巴细胞和粒细胞型白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤。

盐酸美法仑的化学结构式如式1所示：

美法仑及其类似物结构中的氯原子属于易离去基团，周期过长易使氯乙基降解成羟乙基，生成单羟基美法仑盐酸盐(式2所示)，继而又和美法仑发生反应生成美法仑二聚体盐酸盐；使得最终产品质量难以保证。

对美法仑、盐酸美法仑原料和制剂的质量控制，必须有质量合格的杂质对照品。关于美法仑二聚体盐酸盐(式3所示化合物)，目前暂未检索到该化合物的具体制备。因此有必要开发一种稳定、便捷、纯度高的制备美法仑二聚体盐酸盐的方法。

本发明的4-[2-[[4-双(2-氯乙基)氨基]-L苯丙氨酸乙酯基](2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸盐酸盐(即美法仑二聚体盐酸盐)为盐酸美法仑杂质，可以作为杂质对照品控制盐酸美法仑原料或制剂的纯度。

发明内容

本发明一方面提供了式3化合物的制备方法，其化学结构式如式3所示，化学名为4-[2-[[4-双(2-氯乙基)氨基]-L苯丙氨酸乙酯基](2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸盐酸盐(即美法仑二聚体盐酸盐)。

专利US3032584涉及美法仑化合物专利，其制备方法，公开了以4-硝基苯丙氨酸或L-4-硝基苯丙氨酸为原料合成美法仑。在该合成方法中，首先要对原料的氨基酸部分进行保护(乙酯化保护羧基；苯酐保护氨基)得到一个较稳定的全保护物，将对位的硝基部分修饰后，再通过加氢气还原，羟乙基化，氯化三步反应得到美法仑的有效基团氮芥，最后采用盐酸回流的方法对氨基酸部分进行脱保护，得到美法仑产品。

本发明开发的盐酸美法仑杂质—美法仑二聚体盐酸盐的合成新方法，通过一步成酰氯、成酯和纯化得到美法仑二聚体盐酸盐，解决了该杂质获得的便捷性和稳定性；尤其重要的是，本发明对美法仑二聚体纯化方法进行了详细研究，筛选出了更加稳定的柱层析分离条件，美法仑二聚体HPLC纯度可达90％以上。并且本发明的制备条件温和可控，可方便地制备得到4-[2-[[4-双(2-氯乙基)氨基]-L苯丙氨酸乙酯基](2-氯乙基)氨基]-L-苯丙氨酸盐酸盐(即美法仑二聚体盐酸盐)。

具体而言，本发明涉及的式4所示的美法仑二聚体盐酸盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)以式1所示的盐酸美法仑为起始物料，在反应溶剂中与酰化试剂在催化剂的作用下反应制成式2所示的盐酸美法仑的酰氯：

(2)以式2所示的盐酸美法仑酰氯为起始物料，在反应溶剂中与式3所示的单羟基美法仑盐酸盐在缚酸剂作用下反应，反应后通过柱层析方法分离纯化，浓缩、冷冻干燥得到美法仑二聚体盐酸盐：