[发明专利]预测肿瘤对TRAIL类似物敏感性的方法

说明书

本发明公开了一种预测肿瘤对TRAIL类似物敏感性的方法，步骤如下：(1)以现有的肿瘤细胞株作为样本库，通过实时荧光定量PCR测定样本库中肿瘤细胞株的六种基因的mRNA表达水平，以Cq值表示；(2)在体外实验中测定样本库中肿瘤细胞株在不同浓度TRAIL类似物处理下的生存率，指示其对TRAIL类似物的敏感性；(3)以肿瘤细胞株中六种基因的Cq值为自变量，以TRAIL类似物处理下各肿瘤细胞株的生存率为因变量，通过多元线性回归建模，筛选并建立最优的多元线性方程；(4)提取患者肿瘤细胞，检测该其中对应基因的mRNA表达水平的Cq值，代入多元线性方程，通过计算预测该病人对该TRAIL类似物的敏感性。

技术领域

本发明属于新型生物药研发领域，涉及筛选、检测及分析相关因子的mRNA表达水平以预测检测对象对TRAIL类似物的敏感性。

背景技术

DATR是由成都地奥制药集团有限公司自主发明的一种旨在提高人类肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)生物活性和稳定性的新型突变体，即一种TRAIL类似物。它在已知的人类TRAIL基因全序列cDNA的基础上，去除了N端编码第1～113位及第119、第120位氨基酸的碱基序列，保留了C端氨基酸的碱基序列而获得长度为168个氨基酸的人类TRAIL缺失突变体(ZL专利号：01105946.X一种突变的人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体突变体多肽及其用途)。研究表明，DATR具有与野生型TRAIL完全相同的空间构象，而其生物活性和稳定性优于野生型蛋白。

体外实验结果显示，DATR对人类肺、肝、胃、结直肠、乳腺、血液及淋巴、前列腺、卵巢、神经等9个系统的29株传代肿瘤细胞均有不同程度的诱导凋亡作用，而对正常细胞无显著毒性。体内实验结果显示，DATR对处于国内肿瘤发病率前10位的肺癌(NCI-H460)、肝癌(SMMC-7721)、胃癌(MKN45)、结直肠癌(COLO205、HCT-8)、乳腺癌(MDA-MB-231)、及淋巴瘤(29SR)等多种人体肿瘤均具有较强的抗肿瘤作用。体外及体内实验研究表明，在相同剂量下，DATR的抗肿瘤效果优于野生型TRAIL。

然而，与其他所有抗肿瘤药物相似，DATR仅对部分肿瘤患者有较好的疗效。因此，在对肿瘤患者用药前，利用可靠的生物学指标以预测该肿瘤对DATR是否敏感，对其临床应用具有重大意义。

目前已知在肿瘤细胞膜上TRAIL的受体有4种，即DR4，DR5，DcR1，DcR2；可溶性诱骗受体1种，即OPG(osteoprotegerin)(图2,Almasan and Ashkenazi,2003)。其中，OPG仅与TRAIL有极弱的结合能力，其功能尚未报道。当TRAIL与DR4或DR5结合，可诱导受体同型三聚化，招募FADD、CASP8或CASP10前体形成死亡诱导信号复合体(DISC)，进而激活下游以Caspase为核心的凋亡信号通路以促进肿瘤细胞凋亡(图3,Wiezorek et al.,2010)。而DcR1无胞内结构域，DcR2仅有部分胞内结构域，虽然它们亦能与TRAIL结合，但不能激活上述凋亡信号通路。据报道，DcR2还能激活NF kappaB信号通路拮抗肿瘤细胞凋亡。c-FLIP作为上述凋亡信号通路的负向调控因子，因与CASP8拥有相似的结构而被招募至DISC中阻碍CASP8后续结合及加工。由此可见，TRAIL在肿瘤细胞膜上受体、DISC组成及相关调控因子的表达量很可能与肿瘤对TRAIL类似物的敏感性密切相关。此外，已报道的可能与TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的相关因子亦值得关注，如HTATIP2。基于此，本发明提出利用上述相关因子的mRNA表达水平来预测肿瘤对TRAIL类似物敏感性的方法。

发明内容

本发明目的是建立了一种通过检测相关因子的mRNA表达水平，通过计算分析来预测肿瘤对TRAIL类似物敏感性的方法。

本发明的技术方案为：一种利用相关因子表达水平预测肿瘤对TRAIL类似物敏感性的方法，步骤如下：