[发明专利]预测肿瘤对TRAIL类似物敏感性的方法

权利要求书

1.检测基因表达水平的试剂在制备预测肿瘤对DATR敏感性的产品中的用途，其特征在于：基因包括DR4、DR5、DcR2、CASP8、c-FLIP和HTATIP2，肿瘤细胞株来源于肺，结直肠，胸或肝，检测步骤如下：

(1)以上述的肿瘤细胞株作为样本库，通过实时荧光定量PCR测定样本库中肿瘤细胞株的DR4、DR5、DcR2、CASP8、c-FLIP和HTATIP2六种基因的mRNA表达水平，以Cq值表示；

(2)在体外实验中测定样本库中肿瘤细胞株在浓度为0.0002-12μg/mL的DATR处理下的生存率，生存率＝实验组细胞活力/对照组细胞活力，指示其对DATR的敏感性；

(3)以肿瘤细胞株中六种基因的Cq值为自变量，以DATR处理下各肿瘤细胞株的生存率为因变量，通过多元线性回归建模，筛选并建立最优的多元线性方程，公式为：

V＝a*Cq(DR4)+b*Cq(DR5)+c*Cq(DcR2)+d*Cq(CASP8)+e*Cq(c-FLIP)+f*Cq(HTATIP2)+g，其中，V指生存率；Cq(X)指qPCR中目的基因X的绝对定量荧光阈值循环数，或相对于GAPDH的相对定量荧光阈值循环数；a-f为系数，g为常数，均可为0；

(4)提取患者肿瘤细胞株或循环肿瘤细胞或肿瘤组织，检测上述基因的mRNA表达水平，即Cq值，代入多元线性方程，通过计算预测该病人对DATR的敏感性。

2.根据权利要求1所述的检测基因表达水平的试剂在制备预测肿瘤对DATR敏感性的产品中的用途，其特征在于，步骤(1)的方法为：

(a)提取肿瘤细胞株的总RNA，以此为模版反转录构建cDNA文库；

(b)利用实时荧光定量PCR检测DR4、DR5、DcR2、CASP8、c-FLIP和HTATIP2六种基因的mRNA表达水平，以Cq值表示。

3.根据权利要求2所述的检测基因表达水平的试剂在制备预测肿瘤对DATR敏感性的产品中的用途，其特征在于，步骤(b)中，

DR4基因的上游引物为5’-AATCAGGCAATGGACATAA-3’，下游引物为5’-GCAACAACAGACAATCAG-3’，

DR5基因的上游引物为5’-TCAGGCATCATCATAGGA-3’，下游引物为5’-TCAGGTAAGGAAGGACTT-3’，

DcR2基因的上游引物为5’-TTGCCTTCTTGCCTGCTA-3’，下游引物为5’-GTCTCTGGTCGTGGTACA-3’，

CASP8基因的上游引物为5’-AAGAGAATGTTGGAGGAA-3’，下游引物为5’-TTAGGTAGGTAATCAGCAA-3’，

c-FLIP基因的上游引物为5’-GATACAGATGAGAAGGAGATG-3’，下游引物为5’-CCTGACATTAGGTGGAAC-3’，

HTATIP2基因的上游引物为5’-GTGAATCAAGAAGTGGTG-3’，下游引物为5’-CAACAGAATCCAACATCAT-3’。