[发明专利]提高NADPH可用性用于甲硫氨酸产生在审
申请号: | 201611144642.4 | 申请日: | 2011-10-24 |
公开(公告)号: | CN106906176A | 公开(公告)日: | 2017-06-30 |
发明(设计)人: | W·迪彻特;P·瓦苏尔;C·波伊萨特;R·菲格 | 申请(专利权)人: | 代谢探索者公司 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12P13/12;C12R1/01;C12R1/15;C12R1/185;C12R1/22 |
代理公司: | 北京坤瑞律师事务所11494 | 代理人: | 史悦 |
地址: | 法国圣*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 提高 nadph 可用性 用于 甲硫氨酸 产生 | ||
1.一种经修饰用于改进的甲硫氨酸的产生的微生物,其中经优化用于产生甲硫氨酸的微生物经过进一步修饰从而使PntAB的转氢酶活性与在未经过修饰的微生物中观察到的所述活性相比增强,并且其中丙酮酸羧化酶的活性增强。
2.权利要求1的微生物,其中所述PntAB的转氢酶活性与在未经过修饰的微生物中观察到的所述活性相比增加至少50%。
3.权利要求1的微生物,其中编码PntAB的基因过表达。
4.权利要求1-3中任一项的微生物,其中编码丙酮酸羧化酶的基因过表达。
5.权利要求1-4中任一项的微生物,其中编码丙酮酸羧化酶的基因源自埃特里根瘤菌(Rhizobium etli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、萤光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)或棒状杆菌属菌种(Corynebacterium sp.)。
6.权利要求1-5中任一项的微生物,其中其经过修饰以提高一碳代谢。
7.权利要求6的微生物,其中以下活性中的至少一种增强:
a.亚甲基四氢叶酸还原酶MetF的活性
b.甘氨酸裂解复合体GcvTHP和Lpd的活性;
c.丝氨酸羟甲基转移酶GlyA的活性;
d.甲基转移酶MetH或MetE的活性。
8.权利要求1-7中任一项的微生物,其中MetF的活性通过过表达metF基因和/或通过优化其翻译而增强。
9.权利要求8的微生物,其中metF基因在属于Ptrc家族启动子的强启动子的控制下。
10.权利要求1-9中任一项的微生物,其中以下基因种的至少一个的表达增加:cysP、cysU、cysW、cysA、cysM、cysI、cysJ、cysH、cysE、serA、serB、serC、具有降低的反馈敏感性的metA等位基因、thrA或具有降低的反馈敏感性的thrA等位基因。
11.权利要求10的微生物,其中所列出的基因种的至少一个在可诱导启动子的控制下。
12.权利要求1-11中任一项的微生物,其中所述微生物的以下基因种的至少一个的表达弱化:pykA、pykF、purU、yncA或metJ。
13.权利要求1-12中任一项的微生物,其中编码UdhA的基因被缺失。
14.权利要求1-13中任一项的微生物,其中所述微生物选自肠杆菌科(Enterobacteriaceae)或棒状杆菌科(Corynebacteriaceae)。
15.权利要求14的微生物,其中所述微生物选自埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)或棒状杆菌属(Corynebacterium)。
16.一种用于甲硫氨酸的产生的方法,包括以下步骤:
-在包含碳源、硫源和氮源的适当的培养基中培养经修饰用于改进的甲硫氨酸的产生的微生物,和
-从所述培养基中回收甲硫氨酸或一种它的衍生物,
其中所述微生物经修饰以表现PntAB的转氢酶活性与在未经过修饰的微生物中观察到的所述活性相比增强,其中所述微生物经过进一步修饰以增强丙酮酸羧化酶的活性。
17.权利要求16的用于甲硫氨酸的产生的方法,其中所述微生物经修饰以表现PntAB的转氢酶活性与在未经过修饰的微生物中观察到的所述活性相比增强至少50%。
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