[发明专利]一种重组菌催化莱鲍迪甙A制备莱鲍迪甙M2的方法

权利要求书

1.一种重组菌催化莱鲍迪甙A制备莱鲍迪甙M2的方法，其特征在于，将重组菌诱导表达后取粗酶液，加入到反应混合物中催化莱鲍迪甙A生成莱鲍迪甙M2，所述反应混合物中包括莱鲍迪甙A、蔗糖和磷酸钠缓冲液；所述重组菌中同时含有番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因和马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因；所述番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因序列如SEQ.NO.1所示，所述马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因序列如SEQ.NO.2所示；所述反应混合物中莱鲍迪甙A浓度为10g/L，蔗糖浓度为30g/L，粗酶液浓度为8g/L，采用磷酸钠缓冲液调节pH为7.2；所述反应温度为40℃，反应时间为25h；

其中，所述重组菌是将番茄来源糖基转移酶UGTSL2基因克隆到pRSFDuet-1的NdeI与XhoI位点之间，构建得到重组质粒pRSFDuet-SL2，然后再将马铃薯来源蔗糖合酶StSUS1基因克隆到pRSFDuet-SL2的NcoI和EcoRI位点之间，构建得到重组质粒pRSFDuet-SL2-SUS1，将重组质粒pRSFDuet-SL2-SUS1转化到宿主细胞中，得到的重组菌；所述宿主细胞为大肠杆菌BL21（DE3）；

所述重组菌的诱导表达条件为：将重组菌接种到LB培养基中，于37℃、250rpm振荡培养8h，再将培养菌液按2%接种量接入诱导培养基中，于200rpm，30℃培养2h，待OD₆₀₀达到0.2时，转为25℃诱导培养22h，离心收集菌体；

所述诱导培养基配方为25g/L酵母粉、15g/L胰蛋白胨、10g/L氯化钠、2g/L葡萄糖、0.5g/L乳糖、0.05g/L卡纳霉素；

所述LB培养基配方为0.5g/L酵母粉、0.5g/L氯化钠、1g/L胰蛋白胨、0.05g/L卡纳霉素。