[发明专利]用于检测羧肽酶Y的半菁类荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种半菁类荧光探针，其特征在于，该半菁类荧光探针具有式(1)所示的结构；

2.权利要求1所述的半菁类荧光探针的制备方法，其特征在于，该方法包括：在缚酸剂存在下于有机溶剂中，将式(2)所示结构化合物与特戊酰氯接触进行亲核反应；

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中，相对于1毫摩尔的式(2)所示结构化合物，所述特戊酰氯的用量为1-2毫摩尔，所述缚酸剂的用量为1-3毫摩尔，所述有机溶剂的用量为20-30毫升。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其中，所述缚酸剂选自三乙胺、二乙胺、二异丙基胺、吡啶、N,N-二甲氨基吡啶、2,6-二甲基吡啶、碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠和碳酸氢钠中的至少一种；所述有机溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿、四氯化碳、乙腈、丙酮、乙二醇二甲醚、N,N-二甲基甲酰胺和1,2-二氯乙烷中的至少一种。

5.根据权利要求2-4中任意一项所述的制备方法，其中，所述亲核反应的条件包括：温度为零下5℃至30℃，时间为10-120min。

6.权利要求1所述的半菁类荧光探针在检测羧肽酶Y的活性中的应用。

7.一种检测羧肽酶Y活性的方法，其特征在于，该方法包括：

将待测样品与权利要求1所述的半菁类荧光探针接触，使得待测样品中的羧肽酶Y被所述半菁类荧光探针中的特戊酰基所识别，得到接触后的物料；

检测接触后的物料在激发光下发出的荧光强度随时间的增加值，所述荧光强度的增加值指示了待测样品中羧肽酶Y的活性；所述激发光的波长为500-680nm，所述荧光的发射波长为690-740nm。

8.权利要求7所述的检测方法，其中，相对于1μg/mL的羧肽酶Y，所述半菁类荧光探针的用量为2-100μM。

9.权利要求8所述的检测方法，其中所述半菁类荧光探针的用量为2-10μM。

10.权利要求7-9任意一项所述的检测方法，其中，接触的条件包括：温度为25-37℃，pH值为5-9，时间为5-40min。

11.一种羧肽酶Y活性的检测试剂盒，该检测试剂盒包括：权利要求1所述的半菁类荧光探针、羧肽酶Y标准品以及反应缓冲液。