[发明专利]一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法

说明书

一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，包括：(1)实验材料的选择；(2)具体实验步骤：(2.1)无菌外植体的获取；(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤；(2.3)速生无刺槐生根培养步骤；(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件；和(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。本发明通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产，增殖系数高，平均增殖系数达到4以上；生根率高，最高可达95％；炼苗成活率高，平均为90％以上。

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养的方法，具体涉及一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，属于生物技术领域。

背景技术

速生无刺槐是人工选育出的一个刺槐优良无性系新品种，豆科刺槐属落叶乔木，树高可达30～35m。托叶刺小而软，1～2年生树有刺，3年生以后刺基本脱落。树体高大，干型通直，生长迅速，年胸径生长量为2.5～3.0cm，年树高生长量2m以上。叶色浓绿，花白色，有香气，花期5月。主要分布在北部暖温带落叶阔叶林区，分布的城市有沈阳、大连、北京、天津、石家庄、济南、青岛等。适应性强，抗寒、抗旱、耐瘠薄、耐盐碱，是盐碱地以及城市绿化的优良树种。

速生无刺槐属豆科刺槐属树种，有关无刺槐的研究尚处于起始阶段，仅中国农业大学有一篇关于《无刺桅杆槐和无刺槐再生体系的研究》的报道，该文章主要是从叶片再生角度进行无刺槐的研究，主要目的是为了通过建立再生体系进行基因工程育种，文章中无刺桅杆槐和无刺槐的再生率人别为60％、50％，生根率分别为55.6％、72.2％，组培苗移栽成活率为85％。本专利主要目的是通过继代增殖培养实现速生无刺槐的大规模生产，专利中速生无刺槐的增殖系数达到4以上，生根率达到95％以上，大棚炼苗移栽成活率达到90％以上，各项指标标准高，有利于速生无刺槐生产成本的降低，易于实现大规模的工厂化生产。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

一种速生无刺槐组培苗的生根培养方法，其特征在于，包括：

(1)实验材料的选择：

选取继代周期为30～40天，生长健壮、叶片舒展，株高为3～5cm的速生无刺槐组培苗为实验材料，切除基部愈伤及基部叶片，保留1cm左右的顶芽、茎段及芽团；

(2)具体实验步骤：

(2.1)无菌外植体的获取；

(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤；

(2.3)速生无刺槐生根培养步骤；

(2.4)速生无刺槐继代培养及生根培养条件；

(2.5)速生无刺槐组培苗的炼苗与移栽。

其中，步骤(2.1)无菌外植体的获取

选取1～2年生带芽体的健壮根系埋于育苗基质中，待新芽萌发出来后切割成1～2cm长的顶芽或带腋芽的茎段，剪去叶片留3～5mm叶柄，用75％酒精擦拭外植体表面，用洗衣粉水浸泡2min，再置于流水下冲洗0.5～1h；在超净工作台上，用0.05～0.1％的升汞处理10～15min，用无菌水冲洗5～6次，接种至诱导培养基中(MS+0.01～0.1mg/L 6-BA+30g/L糖+5～7g/L卡拉胶)，每瓶接种一株，获得的无菌外植体的成功率为80％。

其中，步骤(2.2)速生无刺槐继代增殖步骤：

(2.2.1)试验材料

选取步骤1中诱导出来的芽直接进行增殖培养，所选材料生长健壮、叶片舒展，利用顶芽、茎段及芽团进行繁殖，其中顶芽高0.8～1.2cm左右、茎段高0.5～1cm左右含至少一个腋芽、芽团高0.5～1cm至少含两个小芽；