[发明专利]黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法

权利要求书

1.黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，其特征是包括以下步骤：

1)、取材：

选用黄精叶钩吻的根状茎的不定芽作为外植体；

2)、不定芽的消毒：

将步骤1)所得的根状茎上的不定芽充分洗涤，然后在超净台上操作，先用75％酒精浸泡处理20～30sec，无菌水冲洗后，用含0.1％升汞灭菌8～10min，无菌水冲洗3～5次；

3)、不定芽的启动培养：

将消毒后的不定芽剥离外围的叶片后接种到启动培养基上，进行不定芽生长及丛生芽的诱导；

所述启动培养基为MS+BA0.6～3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20～30g/l+琼脂5～8g/l，pH为5.6～5.8；

诱导培养条件为：16小时光照，光照强度30～45μmolm^-2s^-1，温度为25±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；

当启动培养基上的不定芽的基部出现至少3个丛生芽时，结束启动培养；

4)、不定芽的快速扩增：

将步骤3)所得的丛生芽分割成含1新芽的芽丛后转接于增殖培养基上进行培养，增殖培养基为MS+BA 0.6～3mg/L+NAA 0.2～0.5mg/L+KT 0～1.0mg/L+2,4-D 0～0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；

培养条件为：16小时光照，光照强度30～45μmolm^-2s^-1，温度为25±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；

待增殖培养基上的新芽至少长出3个丛生芽时，结束此步骤的培养；

5)、不定芽的伸长及生根培养：

将步骤4)所得的丛生芽切割成含2～3株为一丛的不定芽丛转移到生根/伸长培养基上进行培养，生根/伸长培养基为MS+BA0.6mg/L+NAA0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；

培养条件为：16小时光照，光照强度30～45μmoLm^-2s^-1，温度为25±1℃；8小时暗培养，温度为20±1℃；上述光照和暗培养交替进行；

当不定芽丛长到4.0～6.0cm高、且基部有至少5条根时，结束此步骤的培养；

6)、将步骤5)所得的已生根的植株取出，得可出瓶种植的种苗。

2.根据权利要求1所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，其特征是：

以步骤4)所得的丛生芽替代步骤3)所得的丛生芽，重复进行步骤4)的不定芽的快速扩增；待增殖培养基上的新芽长出至少3个丛生芽时，将其进行分割。

3.根据权利要求1或2所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，其特征是：

所述步骤5)为：

将不定芽丛转移到生根/伸长培养基上，经过28～35天的培养，不定芽既能伸长生长，同时在植株的基部产生根，7～14天可诱导形成根，再培养后形成发达的根系。

4.根据权利要求1或2所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，其特征是：

将步骤6)所得的装有生根幼苗的培养容器置于自然温度、光照的环境下锻炼5～7天，然后打开瓶盖，放置1～2天后，将植株基部的生根/伸长培养基洗净，将苗移栽到河沙：泥炭土为1：1的混合基质培养20～35天，开始的10～14天温度为23～25℃，相对湿度为70～80％。

5.根据权利要求1或2所述的黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，其特征是：

启动培养基为：MS+BA2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；

增殖培养基为以下任意一种：

MS+BA3mg/L+NAA0.2mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；

MS+BA2mg/L+NAA 0.2mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；

MS+BA2mg/L+KT 1mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8。