[发明专利]一种携带Pim-1基因的腺相关病毒2及其在修复受损视神经中的应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，视神经损伤后视网膜神经节细胞的内在再生能力低下，是视功能难以恢复的关键因素，如何有效治疗一直是临床医学面临的重大难题。本发明提供了一种携带Pim‑1基因的重组腺相关病毒2载体及其构建方法，所述的腺相关病毒2载体是携带如SEQ ID NO:1所示的Pim‑1基因的DNA序列。本发明还提供携带Pim‑1基因的重组腺相关病毒2载体在制备治疗修复受损视神经药物中的应用。本发明为临床治疗视神经损伤提供新的有力手段和理论基础，对CNS疾病和损伤的治疗也有着重要意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，是一种携带Pim-1基因的腺相关病毒2在制备治疗修复受损视神经药物中的应用。

背景技术

中枢神经系统(CNS)疾病和损伤后，神经再生是非常困难的，如何进行有效治疗一直是临床治疗所困扰的重大难题。视神经为CNS的一部分。视神经损伤后，轴突再生困难的主要原因包括视网膜神经节细胞(RGCs)大量死亡、RGCs内在再生能力低下、引导轴突再生的细胞缺乏、抑制再生的微环境、神经营养因子的不足等。视神经损伤后RGCs的内在再生能力低下，是视神经损伤后再生失败导致视神经萎缩和失明的关键因素。目前，虽然临床上针对受损视神经的治疗开展了大量工作，但其实际疗效不佳，很难让患者恢复视力。

近期关于提高RGCs内在再生能力的研究成果层出不穷：Benowitz研究组通过针刺伤晶状体，玻璃体腔内注射晶体蛋白，激活RGCs的内在再生潜力，使轴突的再生通过视神经压榨伤部位到达远段神经，但数量和生长潜能有限(参见文献[1]de Lima S,Koriyama Y,Kurimoto T,et al.Fulllength axon regeneration in the adult mouse optic nerveand partial recovery of simple visual behaviors.Proc Nat Acad Sci U S A,2012；109(23):9149-54)。O‘Donovan等通过激活RAF-MEK通路的B-Raf，特别是联合敲除PTEN，同时有效地促进了大鼠视神经损伤后的再生(参见文献[2]O'Donovan KJ,Ma K,Guo H,etal.B-RAF kinase drives developmental axon growth and promotes axonregeneration in the injured mature CNS.J Exp Med,2014；211(5):801-14)。Yungher等小鼠玻璃体注射PTEN-shRNA、CNTF的腺相关病毒2及cAMP类似物，再生轴突远达视交叉和视交叉上核并形成突触(参见文献[3]Yungher BJ,Luo X,Salgueiro Y,Blackmore MG,etal.Viral vector-based improvement of optic nerve regeneration:characterization of individual axons’growth patterns and synaptogenesis in avisual target.Gene Therapy,2015；22:811-821)。Nawabi等向PTEN敲除小鼠玻璃体注射DCLKs的腺相关病毒2，轴突再生远达视交叉(参见文献[4]Nawabi H,Belin S,Cartoni R,et al.Doublecortin-like kinases promote neuronal survival and induce growthcone reformation via distinct mechanisms.Neuron,2015；88:704-719.)。由上可见，寻找调节再生的靶分子和基因，并将增强RGCs内在再生能力和影响再生的因素相结合，促进视神经再生，具有光明的临床前景。