[发明专利]一种耐热酯酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种耐热酯酶突变体，其特征在于，该突变体是对来源于Pyrobaculumcalidifontis的野生型耐热酯酶进行突变获得的，野生型耐热酯酶的氨基酸序列为SEQ IDNO.2，所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7。

2.权利要求1所述突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过表达载体pET-23a和PestE酯酶野生型基因序列全合成质粒；

(2)再利用定点突变方法设计引物，用PCR方法引入目的氨基酸突变位点以获得相应突变体。

3.根据权利要求2所述突变体的制备方法，其特征在于，所述PCR引物序列如下：

L89R-F:5'-TGGAGGTGGATTCGTACGTGGTTCTGTGGAAACTC-3'

L89R-R:5'-GAGTTTCCACAGAACCACGTACGAATCCACCTCCA-3'

L40A-F:5'-GAAGTCAAGTCTTATCGCGGTGAAGATGGCAAACG-3'

L40A-R:5'-CGTTTGCCATCTTCACCGCGATAAGACTTGACTTC-3'

F20A-F:5'GCTGCACAATTGCAGGCTAGACCAGATATGG3'

F20A-R:5'CCATATCTGGTCTAGCCTGCAATTGTGCAGC3'

F33A-F:5'GGTGAGAGAGCAGGCCGAGAAGTCAAGTC3'

F33A-R:5'GACTTGACTTCTCGGCCTGCTCTCTCACC3'

L213A-F:5'GTTATTCTTACTGCCGATGCAATGGCCTGGTTTGGTAG3'

L213A-R:5'CTACCAAACCAGGCCATTGCATCGGCAGTAAGAATAAC3'

F289A-F:5'GTCATTCATGGCTTTGTCAATGCCTATCCAATATTAGAGGAAGG3'

F289A-R:5'CCTTCCTCTAATATTGGATAGGCATTGACAAAGCCATGAATGAC3'

4.一种利用权利要求1所述突变体制备的重组质粒。

5.将权利要求4所述制备的质粒转入宿主细胞制得的重组菌株。

6.根据权利要求5所述的重组菌株，其特征在于，所述的宿主细胞为大肠杆菌BL21。

7.权利要求1所述的耐热酯酶突变体在制备环氧化甘油酯中的应用。