[发明专利]一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法有效
| 申请号： | 201611097658.4 | 申请日： | 2016-12-02 |
| 公开（公告）号： | CN106754872B | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 杜克兵;余晓莉;胡兴宜;荣新军;仝瑞冠;李立志 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学;湖北省林业科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 强红刚 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 微生物基因组DNA 杨树木材 测序 分光光度计 基因组DNA 方法提取 分子操作 宏基因组 技术参数 优化 应用 | ||
1.一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA 的方法，该方法包含下述步骤：
（1）收集杨树湿心材或健康边材样本，经液氮研磨后加入活性炭及提取缓冲液，再加入蛋白酶K和十二烷基硫酸钠，混匀；所述的提取缓冲液包含下列组分：1%CTAB+2%PVPP+1.5MNaCl+100mM EDTA+100mM TE pH8.0+0.1M 磷酸钠缓冲液pH8.0，蛋白酶K浓度为20mg/ml，十二烷基硫酸钠的质量浓度为10%；
（2）放入58～62℃水浴1.5～3h，期间颠倒混匀3～4次，然后进行第一次离心，转移第一次离心后的上层水相；
（3）向所述第一次离心后的水相中加入1/2体积的PEG6000，混匀静置后进行第二次离心，去掉第二次离心后的上层水相；
（4）向所述第二次离心后的沉淀中加入TE和醋酸钾，混匀静置后进行第三次离心，转移第三次离心后的上层水相；
（5）向所述第三次离心后的水相中加入等体积的苯酚-氯仿-异戊醇溶液，混匀静置后进行第四次离心，转移第四次离心后的上层水相；苯酚-氯仿-异戊醇溶液中苯酚、氯仿和异戊醇的体积比为 25：24：1；
（6）向所述第四次离心后的上层水相中加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，混匀室温静置0.5-1.5h后进行第五次离心，收集沉淀；
（7）向所述第五次离心后收集到的沉淀先后采用75%酒精、无水酒精洗涤，然后进行第六次离心得到DNA沉淀，使用TE溶解DNA沉淀，再加入RNase A，水浴后得到所提取的微生物基因组DNA。
2.根据权利要求1所述的一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法，其特征在于，步骤(2) 中所述的第一次离心是在 12000rpm、4℃下进行，离心时间为15～25min。
3.根据权利要求1所述的一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法，其特征在于，步骤(3) 中第二次离心是在 12000rpm、4℃下进行，离心时间为4～6min。
4.根据权利要求1所述的一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法，其特征在于，步骤(4)中TE缓冲液包含下列组份：10mM Tris-HCl 和 1mM 乙二胺四乙酸，醋酸钾的浓度为5M。
5.根据权利要求1所述的一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法，其特征在于，步骤(4)中第三次离心和步骤(5)中第四次离心均是在 12000rpm、4℃下进行，离心时间为12～18min。
6.根据权利要求1所述的一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法，其特征在于，步骤(6)中第五次离心和步骤(7) 中第六次离心是在 10000rpm、4℃下进行，离心时间为8～12min。
7.根据权利要求1所述的一种从杨树木材中提取微生物基因组DNA的方法，其特征在于，步骤(7)中是在37℃下水浴，时间为10～20min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华中农业大学;湖北省林业科学研究院，未经华中农业大学;湖北省林业科学研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201611097658.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
