[发明专利]一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明是一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，该试剂盒的主要组成为：鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液；酶标ORF90多抗溶液；稀释液；TMB底物溶液；终止液；鲤疱疹病毒2型阳性对照；阴性对照；包被液；96孔酶标板。本发明还涉及一种检测方法。本发明试剂盒和方法可用于无临床症状的潜伏感染鱼病毒检测，并可进一步应用于鲤疱疹病毒Ⅱ型在鱼体内变化规律的研究，从而为该病毒的防控提供依据。本发明方法与鲫鱼、金鱼的其它常见病毒无非特异性反应，可以用于国内养殖场的疫病诊断和出入境鱼类检疫。

技术领域

本发明涉及一种检测用试剂盒，特别是一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，本发明还涉及利用该检测试剂盒进行检测的方法。

背景技术

近年来，鲤疱疹病毒Ⅱ型（英文名称：Cyprinid herpesvirus Ⅱ，缩写CyHV-2）给我国鲫鱼和金鱼养殖业带来了巨大的危害，疫病爆发时发病率和死亡率极高，经不完全统计，2006年因该病造成的经济损失高达7.18亿元。

现有技术中，对其诊断最直观的方法是对发病鱼组织进行组织学检查后再经电子显微镜观察到疱疹病毒粒子进行确证。目前国内外常用PCR或定量PCR方法检测鲤疱疹病毒Ⅱ型，疱疹病毒存在潜伏感染，外表健康的鱼可能携带病毒，PCR方法能够检测到病毒核酸，但无法确认鱼体内是否存在传染性的病毒粒子，因此有必要建立检测病毒蛋白的免疫学方法。因此，建立检测鲤疱疹病毒Ⅱ型病毒蛋白的夹心ELISA方法对于监控鱼的潜伏感染具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，可以用于出入境水生动物检疫和国内养殖场的疫情监控。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，其特点是，该试剂盒的主要组成为：

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液，1支100 μL，为鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶于水制成的溶液，浓度为10-20 mg/mL；

酶标ORF90多抗溶液，1支100 μL，为酶标ORF90多抗溶于水制成的溶液，浓度为10-20 mg/mL；

稀释液，2瓶，每瓶50 mL，溶液为质量体积浓度为10 g/L的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；

TMB底物溶液，1支，250 μL；为TMB的DMSO溶液，其质量体积浓度

为6 mg/mL；

终止液，浓度为2 M的硫酸溶液1瓶，20 mL；

鲤疱疹病毒2型阳性对照1支，500 μL，为金鱼阳性组织匀浆；

阴性对照1支，500 μL，为阴性金鱼组织匀浆；

包被液，1瓶，20 mL，为含有0.015 M 碳酸钠和0.035 M 碳酸氢钠的水溶液；

96孔酶标板，1块。

本发明所述的一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，其进一步优选的技术方案是：该试剂盒中，所述的磷酸盐缓冲液的重量体积比组成为：

氯化钠 8.0 g

磷酸二氢钾 0.2 g

十二水合磷酸氢二钠 2.9 g

氯化钾 0.2g

吐温-80 0.5 mL