[发明专利]一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液，1支100 μL，为鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶于水制成的溶液，浓度为10-20 mg/mL；

酶标ORF90多抗溶液，1支100 μL，为酶标ORF90多抗溶于水制成的溶液，浓度为10-20mg/mL；

稀释液，2瓶，每瓶50 mL，溶液为质量体积浓度为10 g/L的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液；

TMB底物溶液，1支，250 μL；为TMB的DMSO溶液，其质量体积浓度

为6 mg/mL；

终止液，浓度为2 M的硫酸溶液1瓶，20 mL；

鲤疱疹病毒2型阳性对照1支，500 μL，为金鱼阳性组织匀浆；

阴性对照1支，500 μL，为阴性金鱼组织匀浆；

包被液，1瓶，20 mL，为含有0.015 M 碳酸钠和0.035 M 碳酸氢钠的水溶液；

96孔酶标板，1块；

所述的磷酸盐缓冲液的重量体积比组成为：

氯化钠 8.0 g

磷酸二氢钾 0.2 g

十二水合磷酸氢二钠 2.9 g

氯化钾 0.2g

吐温-80 0.5 mL

双蒸水 1000 mL；

该试剂盒中还包括：

磷酸盐缓冲液PBST，1瓶50 mL，其质量体积比组成为：

氯化钠 8.0 g

磷酸二氢钾 0.2 g

十二水合磷酸氢二钠 2.9 g

氯化钾 0.2 g

吐温-80 0.5 mL

双蒸水 1000 mL；

该试剂盒还包括：

过氧化脲溶液，1瓶100 mL，由过氧化脲与乙酸钠-柠檬酸缓冲液混合制成；

其中，乙酸钠-柠檬酸缓冲溶液的制法是：将17 mL质量体积浓度为94 g/L的柠檬酸溶液加入到500 mL质量体积浓度为81 g/L的乙酸钠溶液中，混合均匀制得；

过氧化脲溶液的制法如下：称取140 mg过氧化脲，并将其加入到100 mL乙酸钠-柠檬酸缓冲液。

2.一种非疹断目的的鲤疱疹病毒Ⅱ型夹心ELISA检测方法，其特征在于，该方法使用权利要求1所述的试剂盒进行检测，其步骤如下：

（1）将试剂盒中的鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF90纯化单抗溶液用稀释液稀释到10 μg/mL，100μL/孔包被酶标板，4 ℃过夜；

（2）用磷酸盐缓冲液PBST洗板，250 μL/孔，洗涤三遍；

（3）加入稀释液封闭酶标板，200 μL/孔，37 ℃反应2h；

（4）用磷酸盐缓冲液PBST洗板，250 μL/孔，洗涤三遍；

（5）将待检测样品、阳性和阴性对照用稀释液按照1:10稀释，100 μL/孔加入酶标板中，25 ℃反应0.5 h；

（6）用磷酸盐缓冲液PBST洗板，250 μL/孔，洗涤三遍；

（7）将酶标ORF90多抗溶液用稀释液按1:1000稀释，100 μL/孔，加入酶标板中，25 ℃反应0.5 h；

（8）取TMB底物溶液1支，加入18 mL双蒸水和2 mL过氧化脲溶液配制成工作溶液，100 μL/孔加入酶标板，25 ℃反应15 min；

（9）加50 μL/孔终止液，在450 nm测定光密度（OD）值；

（10）结果判定：P/N≥2.1，表明对照成立，其中：P为阳性对照OD值，N为阴性对照OD值；当样品OD值/阴性对照OD值≥2.1时，判为鲤疱疹病毒Ⅱ型阳性；样品OD值/阴性对照OD值＜2.1时，判为鲤疱疹病毒Ⅱ型阴性。