[发明专利]一种高纯度D‑阿洛酮糖的制备方法

权利要求书

1.一种D-阿洛酮糖的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将枯草芽孢杆菌的发酵液经离心后，取菌体经均质处理，得到含有D-阿洛酮糖3-差向异构酶的混合液；

所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BLCY-005，于2016年10月26日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.13152，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；

（2）配制质量浓度为20%～60%的果糖溶液，加入含有D-阿洛酮糖3-差向异构酶的混合液，调pH值5.5～6.5，按质量百分比0.001%～0.005%的比例添加氯化钴，在40～60℃条件下，保温反应10～30小时，然后向反应液中流加果糖溶液，维持反应体系中果糖质量浓度为20%～60%，继续反应10～30h，停止反应，制得D-阿洛酮糖粗液；

（3）将步骤（2）制得的D-阿洛酮糖粗液经脱色、过滤、离交、色谱分离、浓缩后，再经过结晶或干燥，制得D-阿洛酮糖。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，离心条件为：温度10～20℃，转速3000r/min，时间30～50分钟。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，均质的条件为：温度10～20℃，压力30mpa～50 mpa，时间10～20min。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，枯草芽孢杆菌的发酵液的制备方法如下：

I、将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BLCY-005接种于种子培养基中，在30～38℃的条件下，增殖培养6～12h，制得种子液；

所述种子培养基组分如下，均为重量百分比：

蛋白胨1%，酵母浸粉0.5%，氯化钠1%，无水硫酸镁0.01%，磷酸二氢钾0.02%，余量水，pH6.0～7.0；

II、将步骤I制得的种子液按体积比1～10%的比例接种于发酵培养基中，在30～38℃发酵培养30～48h，制得枯草芽孢杆菌发酵液；

所述发酵培养基组分如下，均为重量百分比：

酵母浸粉3%，玉米浆粉2%，葡萄糖1%，无水硫酸镁0.01%，磷酸氢二铵0.02%，硫酸铵 0.02%，余量水，pH6.0～7.0。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，含有D-阿洛酮糖3-差向异构酶的混合液的加入量为果糖溶液体积百分比的5%。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，脱色步骤如下：

将步骤（2）制得的D-阿洛酮糖粗液，按质量百分比0.5～1%的比例加入活性炭，80～85℃搅拌30～40min。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，过滤采用板框过滤，过滤压力0.2～0.4Mpa，水流量5.0～6.0t/h。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，离交步骤如下：

将脱色过滤后的粗糖液以3倍树脂体积/小时的流速，在35～55℃通过连续离子交换系统，进行离交脱盐，离交后料液透光率≥98%。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，色谱分离步骤如下：

色谱运行压力0.20～0.30MPa，温度60～70℃，水耗比1:（1.3～1.6），每小时进料1.5～2.0m³，收集D-阿洛酮糖。

10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，浓缩采用四效降膜蒸发器，真空度为0.06-0.09Mpa，料液温度50～85℃，浓缩至原体积的60～75%。

11.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，干燥为喷雾干燥，步骤如下：

浓缩后的糖液进入到干燥塔中，进风温度130～150℃，启动雾化器，液体经喷雾干燥为粉末状固体。

12.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，结晶反应条件为：

糖液质量浓度70～85%，温度50～70℃，添加溶质质量10～30%的晶种，搅拌均匀，于50～70℃静置8～16小时，随后按照3～6h降1℃的速率缓慢降温，同时缓慢搅拌，直至溶液中形成大量均匀、规则的晶粒，分离，制得D-阿洛酮糖。