[发明专利]延缓人源骨髓间充质干细胞体外培养导致衰老的方法

权利要求书

1.一种延缓人源骨髓间充质干细胞体外培养导致衰老的方法，其特征在于，在人源骨髓间充质干细胞中提高FOXP1表达水平；通过在衰老人源骨髓间充质干细胞中上调Foxpl蛋白的表达，抑制细胞周期抑制因子p16的表达，促进人源骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化潜力，延缓人源骨髓间充质干细胞的衰老进程；

是以病毒为载体，转染人源骨髓间充质干细胞，抗生素筛选阳性人源骨髓间充质干细胞克隆并传代扩大培养；具体包括如下步骤：

S1、分离和培养人源骨髓间充质干细胞，按1:3~1:6比例稀释传代培养；

S2、在人源骨髓间充质干细胞传代培养液中按MOI为5~20:1的比例加入含FOXP1基因的慢病毒原液，感染；所述病毒为慢病毒；所述人源骨髓间充质干细胞传代培养液选用含8μg/mL Polybrene、不含任何抗生素的人源骨髓间充质干细胞培养基；

S3、吸去含病毒的培养基，换成含青霉素、链霉素的人源骨髓间充质干细胞培养基，培养，使病毒携带的抗性基因表达；

S4、加入含Puromycin的人源骨髓间充质干细胞培养基进行筛选培养；

S5、将感染并在筛选过程中存活的细胞继续消化传代，待扩增至获得稳转细胞株即可；

步骤S5中，感染并在筛选过程中存活的细胞按1:3~1:6比例继续消化传代；

用哺乳动物细胞表达质粒载体介导，在人源骨髓间充质干细胞中提高FOXP1表达水平，筛选到稳定人源骨髓间充质干细胞克隆并传代。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过同源重组方法，在人源骨髓间充质干细胞的基因组AAVS1，Rosa26，CCR5位点插入FOXP1 cDNA片段，在人源骨髓间充质干细胞中提高FOXP1表达水平，筛选到稳定人源骨髓间充质干细胞克隆并传代。