[发明专利]生物标志物在鉴定检疫性实蝇有效冷处理中的应用及鉴定方法

说明书

本发明涉及生物标志物在鉴定检疫性实蝇有效冷处理中的应用，还涉及一种鉴定检疫性实蝇有效冷处理的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：从待检疫的检疫性实蝇样品提取总代谢物，检测所述总代谢物中生物标志物的含量；S2：将所述待检疫的检疫性实蝇样品的总代谢物中的生物标志物的含量与对照数据进行统计学比较，如果比较结果为差异显著，并且所述生物标志物含量满足阈值时，则判定所述待检疫的检疫性实蝇进行了有效冷处理。本发明使用生物标志物对检疫性实蝇幼虫进行快速、高通量筛查，灵敏度和准确度高，缩短了检疫处理观察期判别的时间，大大降低了检疫处理实验验证的成本。

技术领域

本发明涉及检验检疫领域，更特别地，生物标志物在鉴定检疫性实蝇有效冷处理中的应用及鉴定方法。

背景技术

随着全球经济一体化进程的深入，国际贸易日趋频繁和多样化，导致外来有害生物入侵频率加大，对生态环境和农业生产构成巨大的潜在威胁。中国是水果进出口大国，如何有效防范有害生物的跨境传播，确保我国农业、林业及生态安全，提高我国出口水果产品质量，已经成为我国出入境检疫部门关注的重点之一。

水果能够传带多种危险性外来有害生物，特别是地中海实蝇、番石榴实蝇、木瓜实蝇等水果产业的毁灭性检疫有害生物，寄主范围极广，几乎包含所有经济类水果，繁殖力和适应性强，其卵、幼虫、蛹都可随寄主类果实、包装物及运输工具进行远距离传播。一旦传入就有暴发成灾的可能，其结果不仅酿成重大经济损失，而且对新侵入地区的果蔬种植业构成严重威胁。为了防止外来生物入侵并满足口岸快速通关的需要，一般的做法只能在入境口岸实施溴甲烷熏蒸处理。但溴甲烷作为臭氧层消耗物质，虽然检疫用途的溴甲烷消费属于《蒙特利尔议定书》的豁免范围，但是近年来，国际社会要求包括检疫中使用的溴甲烷都应加速淘汰的呼声越来越高，欧盟已于2010年全面禁止了所有用途的溴甲烷使用。目前较为广泛的检疫处理方法为冷处理。

然而，有些携带有害生物的水果不经冷处理，就试图进入我国市场。还有些进行过冷处理后，幼虫不会立刻死亡，甚至有些幼虫会通过滞育度过胁迫阶段。目前对于昆虫是否进行检疫处理鉴定的技术还处于空白阶段，主要还局限在实验室饲养观察的方法，须经实验室培养后才能判读是否进行过冷处理，或者判断处理是否有效，但这么做耗时较长(一般需一周以上)，影响入境货物的通关速度。所以，快速判别幼虫是否进行冷处理，较好地防范了外来有害生物的入侵，对保障我国生物安全有重要的理论意义和实用价值。因此，需要一种快速可靠的方法来鉴定待检疫的货物是否进行过有效的冷处理。

发明内容

本发明基于代谢组学技术，依靠现代化学计量学和计算机模型系统，处理分析不同处理的昆虫体内的代谢物质，提取出有用的特征，从而达到灵敏、准确、高效识别昆虫幼虫处理有效性的目的，为检验检疫决策做出有力的技术支持。

基于此，本发明提供了生物标志物在鉴定检疫性实蝇有效冷处理中的应用。

优选地，所述生物标志物为α-羟基戊二酸或焦棓酸。

本发明还提供了一种鉴定检疫性实蝇有效冷处理的方法，其包括以下步骤：

S1：从待检疫的检疫性实蝇样品提取总代谢物，检测所述总代谢物中生物标志物的含量；

S2：将所述待检疫的检疫性实蝇样品的总代谢物中的生物标志物的含量与对照数据进行统计学比较，如果比较结果为差异显著，并且所述生物标志物含量满足阈值时，则判定所述待检疫的检疫性实蝇进行了有效冷处理。

进一步地，所述生物标志物的含量通过GC/MS检测得到。

进一步地，S1包括以下步骤：

S1.1：提取总代谢物，得到总代谢物提取液；

S1.2：向所述总代谢物提取液中添加内标；

S1.3：吹干，加入甲基化试剂进行甲基化；