[发明专利]生物标志物在鉴定检疫性实蝇有效冷处理中的应用及鉴定方法

权利要求书

1.生物标志物在鉴定检疫性实蝇有效冷处理中的应用,其特征在于,

所述生物标志物为α-羟基戊二酸或焦棓酸。

2.一种鉴定检疫性实蝇有效冷处理的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：从待检疫的检疫性实蝇样品提取总代谢物，通过GC/MS检测所述总代谢物中生物标志物的含量, 所述生物标志物为α-羟基戊二酸或焦棓酸，具体步骤包括：

S1.1:提取总代谢物，得到总代谢物提取液,所述总代谢物的提取方法为：取待检疫的检疫性实蝇样品，加入提取液，进行组织破碎，再次加入提取液，涡旋震荡30s，4℃放置20min，4℃ 16000g离心15min，取上清，向残渣中加入甲醇，涡旋震荡30s，4℃放置20min，4℃ 16000g离心15min，取上清与前一次上清混合得到所述总代谢物提取液，所述提取液由体积比为2:5:2的的氯仿、甲醇和水组成；

S1.2:向所述总代谢物提取液中添加内标；

S1.3:吹干，加入甲基化试剂进行甲基化，所述甲基化试剂为盐酸甲氧胺吡啶，甲基化条件为37℃震荡反应90min；

S1.4：加入烷基化试剂进行烷基化，所述烷基化试剂为TMCS与BSTFA按照体积比1:99配制而成，所述烷基化的条件为70℃反应60min；

S1.5：进行GC/MS检测,所述GC/MS检测条件为：进样口温度280℃，EI离子源温度230℃，四极杆温度150℃，高纯氦气作为载气，不分流进样，进样量1.0 μL；升温程序为：初始温度60 ℃，维持2 min，10℃/min的速度升至140℃，然后以4℃/min的速度升至240℃，最后以15℃/min的速度升至300℃，并维持8 min；

S1.6：通过数据分析得到所述生物标志的含量；

S2：将所述待检疫的检疫性实蝇样品的总代谢物中的生物标志物的含量与对照数据进行统计学比较，如果比较结果为差异显著，并且所述生物标志物含量满足阈值时，则判定所述待检疫的检疫性实蝇进行了有效冷处理。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述内标为半乳糖醇。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述对照数据为未经冷处理的检疫性实蝇的总代谢物中的生物标志物含量。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S2中所述统计学比较为t检验，当t检验结果为P值小于0.05，并且待待检疫的检疫性实蝇的总代谢物中的生物标志物含量与未经冷处理的检疫性实蝇的总代谢物中的生物标志物含量的比值的Log₂对数大于1或小于-1时，判定所述待检疫的检疫性实蝇进行了有效冷处理。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在进行t检验后，还进行ROC曲线绘制，当ROC曲线的曲线下面积大于0.7时，则所述判定可信度高。