[发明专利]酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体及其构建方法在审
| 申请号： | 201611067652.2 | 申请日： | 2016-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN108118066A | 公开（公告）日： | 2018-06-05 |
| 发明（设计）人： | 蔡磊;高毅;潘明新;李阳 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学珠江医院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京市立方律师事务所 11330 | 代理人： | 刘延喜;王增鑫 |
| 地址： | 510282 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 原核表达载体 酪蛋白激酶 重组蛋白 构建 限制性酶切位点 核苷酸序列 扩增 引物 克隆 原核表达系统 大鼠细胞 大鼠 成功 | ||
1.一种酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体，其特征在于：其包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列、限制性酶切位点NdeⅠ和限制性酶切位点BamHⅠ。
2.如权利要求1所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体，其特征在于：所述原核表达载体为pET-16b。
3.如权利要求1所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体，其特征在于：所述SEQ ID No.1编码氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的重组蛋白。
4.一种如权利要求1～3任意一项所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：
根据GenBank数据库收录的大鼠酪蛋白激酶Iα的核苷酸序列设计扩增CKIα的引物；
获取大鼠细胞的全cDNA；
利用所述扩增CKIα的引物从所述cDNA中的克隆CKIα基因；
将所述克隆获得的CKIα基因与原核表达载体进行连接，获得重组的原核表达载体。
5.如权利要求4所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法，其特征在于，所述扩增CKIα的引物引入了5’端的限制性酶切位点NdeⅠ和3’端的限制性酶切位点BamHⅠ。
6.如权利要求5所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法，其特征在于，所述扩增CKIα的引物包括如SEQ ID No.3所示的上游序列和如SEQ ID No.4所示的下游序列。
7.如权利要求4所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法，其特征在于，所述大鼠细胞为大鼠肝脏细胞。
8.如权利要求4所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法，其特征在于，所述CKIα扩增用的PCR温度条件为：
1)98℃3min；
2)98℃，10s；58.8℃，10s；72℃，1min；35个循环；
3)72℃8min。
9.如权利要求4所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法，其特征在于，所述获得的重组的原核表达载体通过以下至少一种方式进行筛选和鉴定：
限制性酶切图谱法；
测定其核苷酸序列；
诱导重组蛋白的表达并进行Western Blotting分析。
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