[发明专利]鸡白痢抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种鸡白痢抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒，包括沙门氏菌表面蛋白InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂和分泌蛋白SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂，InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂可通过乳胶凝集试验快速检测沙门氏菌抗体，SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂可通过乳胶凝集试验检测除鸡白痢以外血清型的沙门氏菌抗体，两者组合用于负筛选鸡白痢抗体阳性血液或血清样本；本发明还公开了沙门氏菌表面蛋白InvJ重组蛋白和分泌蛋白SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂的制备方法。本发明具有抗原稳定、特异性强，敏感度高的优点，克服了现有鸡白痢凝集抗原生产菌种潜在的变异性及其培养条件变化导致的抗原不稳定性的问题。

技术领域

本发明属于生物工程和检测技术领域，具体涉及一种鸡白痢沙门氏菌抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒，同时涉及该检测试剂盒中InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂和SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂的制备方法，还涉及该试剂盒在检测鸡白痢沙门氏菌感染抗体中的应用。

背景技术

沙门氏菌具有多种血清型，可感染鸡群的主要有鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等血清型。其中鸡白痢(Pullorum Disease,PD)是由鸡白痢沙门氏菌(SG)引起的一类传染疾病，是目前危害养鸡业的主要传染病之一。鸡白痢沙门氏菌可垂直传播和水平传播，对雏鸡危害很大，感染雏鸡表现为不吃饲料，怕冷，身体蜷缩，呼吸困难，精神沉郁或昏睡，排白色粘稠或淡黄、淡绿色稀便，肛门有时被硬结的粪块封闭，可引起较高的死亡率。成年鸡感染较少有临床症状，少数感染严重的病鸡表现精神萎靡，稀便，出现肝脏、脾脏肿大。产蛋鸡可见卵巢萎缩，卵子变性，病鸡产蛋停止。由于该病可水平和垂直传播，可引起雏鸡大面积死亡，难于根治，给养鸡业造成严重的经济损失。

目前的防控策略为净化，通过淘汰抗体阳性的种鸡，在鸡场中净化鸡白痢沙门氏菌，以达到防控的目的。因此高效的抗体检测方法对鸡白痢净化具有关键的作用。目前主要采取全血或血清玻板凝集试验，其抗原成分为灭活的全菌，我国已有用于检测鸡白痢的平板染色抗原产品，但灭活的全菌作为抗原在实际应用中受制备种子菌批次、生长状态和生产工艺等影响，可引起由于抗原成分不稳定而引起的非特异性反应，使得检测存在假阳性和假阴性，导致鸡白痢阳性鸡只淘汰不准确，给养殖者造成了严重的经济损失，因此亟需一种可以更准确高效鉴定鸡白痢沙门氏菌感染的检测方法。

常见感染鸡群的沙门氏菌包括了鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌等多个血清型，其中鸡白痢沙门氏菌由于基因退化，导致其相比其它血清型沙门氏菌宿主单一。表面蛋白InvJ是沙门氏菌中高度保守的特异性蛋白之一。SopA为分泌蛋白，通过对多种血清型沙门氏菌的基因序列分析，我们发现sopA基因在沙门氏菌多种血清型中比较保守，但是特殊的是在所有鸡白痢沙门氏菌中，SopA基因中间有一个碱基发生突变，产生了终止密码子，导致鸡白痢沙门氏菌不能表达SopA蛋白C端，因此SopA蛋白C端可作为准确区分鸡白痢沙门氏菌与其它血清型沙门氏菌感染的负筛选诊断靶标。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种鸡白痢抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒，通过沙门氏菌表面抗原InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂和分泌蛋白SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂的组合，用于鸡白痢抗体负筛选，重复性好，敏感性高。

本发明的另一个目的是在于提供了一种鸡白痢抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒的制备方法，优化了沙门氏菌表面蛋白InvJ重组蛋白致敏乳胶试剂和沙门氏菌分泌蛋白SopA C端重组蛋白致敏乳胶试剂的制备方法，所建立的制备方法偶联效率高，产品凝集效果好。

本发明还有一个目的是在于提供了一种鸡白痢抗体乳胶凝集负筛选检测试剂盒在检测鸡白痢沙门氏菌感染抗体中的应用，与现有的全血平板凝集检测方法相比，特异性强，重复性好，敏感性高。

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术方案：